Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2023 |
| Autor(a) principal: |
Silva, Evelyn Cristine da [UNESP] |
| Orientador(a): |
Não Informado pela instituição |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Palavras-chave em Português: |
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| Link de acesso: |
http://hdl.handle.net/11449/239434
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Resumo: |
Salmonella está presente na cadeia produtiva avícola e é um grande desafio no que se refere à segurança dos alimentos e sanidade animal. Técnicas de diagnóstico molecular vêm sendo amplamente utilizadas por proporcionarem resultados rápidos e seguros no diagnóstico deste patógeno. Assim, o objetivo do estudo foi avaliar a utilização da LAMP em comparação à qPCR para o gene invA para detecção de Salmonella associada à qPCR multiplex para identificação e diferenciação simultânea de S. Enteritidis, S. Typhimurium, S. Pullorum e S. Gallinarum. Para a metodologia do estudo a técnica de LAMP foi aplicada utilizando dois kits comercias (LAMP, WarmStart® Colorimetric LAMP 2X Master Mix e WarmStart® LAMP 2X Master Mix), as três técnicas foram avaliadas quanto a especificidade para 21 sorovares diferentes de Salmonella e para 37 cepas dos sorovares de interesse. Foi preconizado a determinação do limiar de detecção das técnicas e as eficiências das reações de qPCR e qPCR multiplex. Para validação as técnicas foram aplicadas em 33 amostras de carcaças de frangos e comparadas aos resultados de microbiologia convencional. Como resultados a LAMP foi específica na detecção dos diferentes sorovares de Salmonella obtendo os mesmos resultados em ambos os kits, mas apresentou baixos limiares de detecção variando entre 101 a 104 UFC/reação. Em comparação, a qPCR para o gene invA obteve melhores limiares de detecção (100 a 102 UFC/reação), atingindo igual especificidade e melhor repetibilidade nos ensaios. A multiplexação da qPCR na identificação dos diferentes sorovares também apresentou boa especificidade, com o limiar de detecção entre 101 a 102 UFC/reação. Os resultados obtidos nas análises em carcaça de frango sugerem uma correspondência entre os resultados obtidos nos métodos moleculares e na microbiologia convencional e levantam uma discussão importante ao tema envolvido. O estudo estabeleceu ensaios padronizados no diagnóstico de Salmonella e os resultados são precursores para aplicações futuras das técnicas em análises de rotina laboratorial. |
