Expressão gênica diferencial dos transcriptomas de túbulos de Malpighi de Melipona scutellaris expostos ao tiametoxam

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Miotelo, Lucas [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Abelha sem ferrão; Destoxificação; Neonicotinóides; Montagem de novo; Sequenciamento; HSP70; HSP90; Tunel; De novo assembly; Neonicotinoid; Stingless bee; Detoxification; Sequencing
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/236317

No Brasil o consumo de inseticidas neonicotinóides, como o tiametoxam (TMX), é uma prática comum em culturas agrícolas. O uso indiscriminado de TMX afeta insetos não alvo, como as abelhas. Melipona scutellaris é uma espécie de abelha sem ferrão que foi inserida em uma lista do IBAMA, juntamente com o TMX, para que sejam realizados estudos toxicológicos. O presente estudo realizou uma análise de expressão gênica diferencial dos túbulos de Malpighi (Mt) de M. scutellaris expostas à CL50/100 do TMX por meio da análise transcriptômica. Além disso, foi avaliada a imunomarcação das proteínas de choque térmico (HSP) 70 e 90, juntamente com a busca por HSPs expressas no transcriptoma e a aplicação do método de TUNEL para detectar morte celular. Após a montagem de novo do transcriptoma, foram identificados 237 genes diferencialmente expressos (DEGs) e agrupados em nove clusters. Foram encontrados DEGs envolvidos em processos de destoxificação, excreção, regeneração tecidual, respiração celular, estresse oxidativo, apoptose, sinalização celular e sistema imune. A imunomarcação de HSP70 aumentou em um dia e diminuiu em oito dias de exposição ao TMX. Enquanto a HSP90 diminuiu em um dia e aumentou em oito. Já o método de TUNEL detectou fragmentação de DNA apenas em oito dias. Além disso, não existem DEGs relacionados a HSPs e por meio da análise de TPM (trascrits per milion) foi identificada que uma isoforma de HSP70 foi a proteína de choque térmico mais expressa. Considerando os resultados do transcriptoma, o metabolismo celular em Mt foi afetado principalmente após oito dias de exposição. Nove genes foram selecionados de diferentes clusters e validados por RT-qPCR. De acordo com nossos resultados, o TMX promove vários tipos de danos nas células dos Mt à nível molecular. Portanto, a interferência em diferentes processos celulares pode afetar diretamente a saúde de M. scutellaris, comprometendo funções essenciais dos Mt. Já os dados obtidos pela imunomarcação e análise do transcriptoma são conflitantes uma vez que não há nenhum DEG e a imunomarcação evidencia diferenças entre os grupos controle e exposto. Essas diferenças podem ser resultantes da alta sensibilidade desses imunomarcadores. O presente estudo foi o primeiro a avaliar os efeitos de um neonicotinóide na expressão gênica de uma abelha sem ferrão e evidencia a importância de análises moleculares para estudos ecotoxicológicos.