Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2017 |
| Autor(a) principal: |
Weyh, Aline |
| Orientador(a): |
Boldo, Juliano Tomazzoni
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| Banca de defesa: |
Pinto, Paulo Marcos
,
Schrank, Augusto
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| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal do Pampa
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| Programa de Pós-Graduação: |
Especialização Cidades, Culturas e Fronteiras 2 ed
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| Departamento: |
Campus São Gabriel
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
http://dspace.unipampa.edu.br:8080/jspui/handle/riu/4533
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Resumo: |
Sistemas de expressão em fungos vêm sendo utilizados em várias abordagens de análise funcional como ferramentas para alterar a expressão de genes. Em Metarhizium anisopliae, no entanto, poucos estudos têm sido conduzidos com relação a regiões promotoras homólogas eficientes e seu uso na construção de sistemas de expressão que possam facilitar tais abordagens. Este fungo entomopatogênico utilizado em biocontrole é amplamente conhecido por sua capacidade de infectar uma ampla gama de artrópodes de importância econômica, desde pragas agrícolas até vetores de doenças. Em seu processo infectivo, M. anisopliae penetra diretamente na cutícula do hospedeiro valendo-se de recursos multifatoriais que incluem a pressão mecânica exercida por apressório e a secreção de hidrolases, entre outros. Em um dos estágios de infecção, ao atingir a hemolinfa do hospedeiro, este fungo se diferencia em blastosporos e se dissemina no hospedeiro pelo sistema circulatório. A hemolinfa de artrópodes apresenta como principal componente, o dissacarídeo trealose. Para captar e utilizar este nutriente, o fungo secreta uma trealase ácida que hidrolisa a trealose em duas unidades de glicose. Em uma análise genômica, um ortólogo putativo do gene que codifica para esta hidrolase (ATM1) foi identificado em M. anisopliae. Todavia, poucos relatos na literatura fazem referência à região 5’UTR deste gene, assim como, elementos regulatórios que possam dar indícios da sua regulação. Sugere-se que elementos envolvidos na repressão catabólica por glicose estejam presentes, tal como elementos responsivos à trealose. A compreensão dos mecanismos envolvidos na regulação de promotores é importante não apenas para o conhecimento básico do seu funcionamento, mas também para o desenvolvimento de ferramentas para estudar a função de genes. Vetores de expressão reguláveis são ferramentas moleculares úteis na investigação da função gênica e seu diferencial é permitir a regulação do promotor de forma a obter-se o controle mais preciso da expressão do gene em estudo. O promotor da trealase ácida, em estudo neste trabalho, provavelmente, somente é induzido na hemolinfa de hospedeiros o que permite o controle da expressão de genes de interesse em meios que mimetizem as condições encontradas na hemolinfa, em especial a presença de trealose. Este trabalho objetivou analisar a região promotora do gene da trealase ácida de M. anisopliae quanto a sua regulação por fontes de carbono. Foram construídas linhagens contendo cassetes inseridos no genoma de M. anisopliae linhagem E6 contendo os genes repórter da proteína verde fluorescente, ou do inglês GFP (green fluorescent protein), e vermelho fluorescente (yeCherry) sob a regulação de diferentes sequências da região promotora putativa de interesse. Os transformantes foram analisados quanto à indução da expressão dos genes repórter com trealose e repressão com glicose de forma quantitativa por análise do mRNA produzido (RTqPCR). Foi possível identificar uma região promotora mínima funcional de 750 pb que controla a expressão de genes repórter e pode ser induzida por trealose. Estes resultados demonstram que o promotor homólogo da trealase ácida de M. anisopliae é regulado pelas fontes de carbono testadas e oferecem uma nova ferramenta para estudos de função gênica. |
