Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2016 |
| Autor(a) principal: |
Wohlgemuth, Kenny Nieradka
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| Orientador(a): |
Pincerati, Márcia
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| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Positivo
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia Industrial
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| Departamento: |
Pós-Graduação
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
https://repositorio.cruzeirodosul.edu.br/handle/123456789/2608
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Resumo: |
A reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa quantitativa (RT-qPCR) é atualmente uma das técnicas mais utilizadas em estudos que avaliam a expressão gênica. Devido a algumas particularidades inerentes à técnica, são necessários métodos de normalização dos dados para que se possa alcançar resultados confiáveis e precisos. O método mais comumente empregado para esta normalização é por meio do uso de genes de referência, que devem apresentar expressão estável nas condições experimentais específicas. Assim, a seleção e validação de genes de referência é um passo essencial em estudos que visam analisar a expressão gênica de alvos específicos. O objetivo deste trabalho foi encontrar genes de referência que apresentem a menor variação em sua expressão para serem utilizados como normalizadores em um modelo experimental de neurodegeneração. Para isto, utilizou-se como tecido específico o hipocampo de ratos Wistar previamente injetados via intracerebroventricular com estreptozotocina, que é conhecida por induzir modificações moleculares similares às que ocorrem na doença de Alzheimer. Este modelo animal é muito importante para uma melhor compreensão das alterações moleculares e bioquímicas que ocorrem nesta doença. Os genes de referência escolhidos para a análise foram os mais corriqueiramente utilizados em estudos que utilizam a RT-qPCR no sistema nervoso central: RNA ribossômico 18S (18s RNA), beta-actina (ActB), gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (Gapdh), hipoxantina fosfoborisil transferase 1 (Hprt1) e proteína ribossomal L13A (Rpl13a). Foram utilizados três softwares, geNorm, NormFinder e BestKeeper, para avaliar a estabilidade dos genes de referência candidatos. Os programas indicaram Rpl13a como o gene de referência mais estável no hipocampo de ratos injetados com estreptozotocina. Sendo assim, sugere-se que a utilização de Rpl13a como gene de referência em estudos que utilizam RT-qPCR permitirá uma normalização correta e confiável dos dados de expressão gênica neste modelo animal de neurodegeneração. |
