Produção de hibridomas e clones produtores de anticorpos monoclonais anti- Nucleosídeo trifosfato difosfohidrolase 1 (NTPDase-1) recombinante de Trypanosoma cruzi

• Ano de defesa: 2010
• Autor(a) principal: Valle, Myrian Augusta Araújo Neves do
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Análises quantitativas e moleculares do Genoma; Biologia das células e dos tecidos; Mestrado em Biologia Celular e Estrutural; UFV
• Palavras-chave em Português: NTPDase-1; Hibridoma; Anticorpos monoclonais; T. cruzi; Hybridoma; Monoclonal; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/2330

O protozoário Trypanosoma cruzi, é o agente etiológico da doença de Chagas. As ecto-nucleotidases da família E-NTPDases são enzimas capazes de hidrolisar nucleotídeos tri e/ou difosfatados nos seus produtos monofosfatados. A NTPDase-1 de T. cruzi é uma proteína presente na superfície do mesmo, com possibilidade de também ser secretada para o meio extra-celular. Sua função ainda não é totalmente esclarecida, porém dados recentes sugerem fortemente sua participação na infectividade e virulência do parasito sendo considerada um bom alvo para bloqueio da infecção. Devido a dificuldade de diagnóstico na fase crônica, a morbidade causada pela doença e a deficiência do tratamento, é de extrema importância o desenvolvimento de novas e mais eficientes metodologias de diagnóstico e tratamento, sendo, neste caso os anticorpos monoclonais uma poderosa ferramenta. A proposta do presente trabalho foi a produção de anticorpos monoclonais que reconhecessem especificamente a NTPDase-1 de T. cruzi em detrimento da NTPDase-1 de Leishimania infantum chagasi. Para isso realizou-se a expressão heterologa da NTPDase-1 em sistema bacteriano (E.coli BL-21) e sua purificação por cromatografia de afinidade em coluna de níquel-agarose (Ni-NTA). Utilizou-se para as imunizações dos camundongos a proteína obtida, sendo a confirmação e titulação do soro hiperimune realizada por dot-ELISA. Linfócitos B dos camundongos imunizados foram fusionados com células de mieloma (SP2/0) para obteção dos hibridomas, sendo 47,13% de hibridomas secretores de anticorpos anti-NTPDase-1 de T. cruzi, os hibridomas foram selecionados pelo método de ELISA indireto. Após a diluição limitante, 49 clones reconheceram a NTPDase-1 recombinante de T. cruzi o que representa aproximadamente 27% de clones positivos. Além disso 10 clones reconheceram também a NTPDase-1 de Leishmania infantum chagasi. Portanto, isolamos 39 clones que reconheceram especificamente somente a NTPDase-1 recombinante de T.cruzi.