Efeito da adição de um quelante de cálcio sobre a qualidade do sêmen descongelado de cães

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Souza, Thyara de Deco
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Biotecnologia, diagnóstico e controle de doenças; Epidemiologia e controle de qualidade de prod. de; Doutorado em Medicina Veterinária; UFV
• Palavras-chave em Português: EDTA; Capacitação; Criopreservação espermática; Capacitation; Sperm cryopreservation; CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/1462

Objetivou-se por meio deste trabalho avaliar o efeito da redução da quantidade de cálcio livre no meio de congelamento, utilizando o quelante de cálcio EDTA nas concentrações de 0,3% e 0,5%, sobre a qualidade do sêmen descongelado de cães. O ejaculado de três cães sem raça definida foi coletado por manipulação peniana e avaliado quanto ao vigor, motilidade espermática, morfologia espermática e pelo teste hiposmótico (HOST). Posteriormente, o sêmen foi separado em três alíquotas, as quais foram diluídas respectivamente no meio controle (TGE), de forma a se obter uma concentração final de 50 x 106 espermatozoides móveis/mL, 6% de glicerol e 0,5% de Equex STM Paste® em meio Tris-Citrato com gema de ovo (20% V/V); no meio de congelamento EDTA 0,3, com a mesma constituição do TGE, porém acrescido de EDTA para uma concentração final de 0,3%; e no meio de congelamento EDTA 0,5 em que o EDTA foi acrescido para uma concentração final de 0,5%. Após envasado em palhetas de 0,25mL o sêmen de cada tratamento foi resfriado por duas horas e congeladas em vapor de nitrogênio por 15 minutos. As amostras foram descongeladas por imersão em água a 37oC, durante sete segundos e avaliadas da mesma forma que o sêmen fresco e pelos testes de termorresistência, de ligação à membrana perivitelina de ovo de galinha (MPOG) e quanto à integridade das membranas plasmática e do acrossoma por coloração com sondas fluorescentes. A concentração do cálcio foi dosada, em espectrofotômetro, no sêmen fresco diluído no meio TGE e depois de descongelado. Houve redução (Duncan a 5% de significância; p<0,05) na concentração de cálcio em ambos os tratamentos EDTA 0,3 e EDTA 0,5, porém somente quando EDTA foi adicionado para a concentração final de 0,5% foi possível indisponibilizar todo o cálcio livre presente no meio. De acordo com a coloração por sondas fluorescentes a redução ou a eliminação do cálcio livre no meio não foi capaz de reduzir a quantidade de espermatozoides descongelados com acrossoma lesado/reagido (p>0,05) em relação ao grupo TGE, com 10,8% a 14% de espermatozoides apresentando ambas as membranas íntegras. No teste hiposmótico, não houve diferença (p>0,05) na quantidade de espermatozoides com integridade funcional da membrana nos tratamentos EDTA 0,3 e EDTA 0,5 em relação ao grupo TGE. Não houve diferença na quantidade de espermatozoides aderidos à MPOG e na longevidade espermática (TTR) entre o grupo TGE e os tratamentos EDTA 0,3 e EDTA 0,5. Não houve diferença (p>0,05) na motilidade espermática entre o grupo TGE (74,70%) e o tratamento EDTA 0,3 (62,78%) porém, houve redução (p<0,05) para este parâmetro no tratamento EDTA 0,5 (45%), enfatizando a importância do cálcio para a motilidade espermática. A redução ou eliminação do cálcio no meio de congelamento, portanto não foi capaz de reduzir a ocorrência de criocapacitação e reação acrossomal prematura, o que melhoraria a qualidade espermática após o descongelamento. Desta forma, há outros fatores presentes no meio e/ou no processamento usado para a criopreservação que estão provocando lesão e favorecendo a ocorrência da capacitação e RA prematuras nos espermatozoides.