Construção de cassetes de expressão para silenciamento de genes da biossíntese de ácidos graxos em soja via RNA de interferência

• Ano de defesa: 2007
• Autor(a) principal: Sousa, Cassiana Severiano de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Bioquímica e Biologia molecular de plantas; Bioquímica e Biologia molecular animal; Mestrado em Bioquímica Agrícola; UFV
• Palavras-chave em Português: Silenciamento gênico; Ácidos graxos; Soja; RNA de interferência; Engenharia genética vegetal; Regulação da expressão gênica; Clonagem molecular; Gene silencing; Fatty acids; Soybean; RNA interference; CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::AGRONOMIA::FITOTECNIA::MELHORAMENTO VEGETAL
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/2467

O óleo de soja é composto em sua maior parte por gordura insaturada, sendo que os ácidos graxos polinsaturados (ácidos linoléico e linolênico), monoinsaturado (ácido oléico) e saturados (ácido palmítico e esteárico) correspondem, em média, a 61%, 25% e 15%, respectivamente. Alterações nas proporções relativas destes ácidos graxos na fração óleo, podem ser obtidas pela modificação genética da expressão de enzimas-chave da biossíntese de ácidos graxos polinsaturados, através de transformação genética de plantas via silenciamento gênico. Dentre essas enzimas, destacam-se as dessaturases, as fosfotransferases e as aciltransferases. Através da modificação da expressão dessas enzimas, é possível a obtenção de linhagens de soja com óleos com menor conteúdo de ácido linolênico, maior conteúdo de ácido oléico e, conseqüentemente, maior estabilidade oxidativa. Os objetivos deste trabalho foram isolar os fragmentos dos genes da oleoil dessaturase, 1,2-diacilglicerol colinafosfotransferase e lisofosfatidilcolina aciltransferase e construir cassetes de expressão para o silenciamento, via RNA de interferência, para esses três genes em sementes de soja. Foi possível isolar os fragmentos dos três genes, subclonar os fragmentos sense e antisense no vetor pKANNIBAL e transferir as construções para o vetor binário pCAMBIA 3301. Foram obtidos quatro cassetes de expressão para silenciamento gênico. Destes, dois foram para o gene da oleoil dessaturase, um para o gene da 1,2-diacilglicerol colinafosfotransferase e o outro para o gene da lisofosfatidilcolina aciltransferase. Para os três genes foram obtidos cassetes de silenciamento dirigidos pelo promotor 35SCaMV, sendo que para a dessaturase também foi obtido o cassete com o promotor do gene da subunidade α da proteína de reserva de soja β-conglicinina.