Identificação de fatores de transcrição que controlam a expressão do gene GmASR3 de soja

• Ano de defesa: 2012
• Autor(a) principal: Dadalto, Silvana Pinheiro
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Bioquímica e Biologia molecular de plantas; Bioquímica e Biologia molecular animal; Mestrado em Bioquímica Agrícola; UFV
• Palavras-chave em Português: GmASR3; Soja; Proteína-DNA; Soybean; Protein-DNA; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/2453

Proteínas ASR (ABA, Stress and ripening induced protein) são induzidas em situações de estresses, maturação ou na presença de ABA, em diversas espécies vegetais, como Lírio (Lilium longiflorum); cana de açúcar (Saccharum officinarum); uva (Vitis vinífera); arroz (Oriza sativa); petúnia, banana (Musa acuminata e Musa balbisiana) e milho (Zea mays), entre outros. No entanto nenhum gene ASR foi encontrado em Arabidopsis. ASRs são proteínas pequenas, hidrofílicas e sem estrutura definida. Sua função é desconhecida, assim como a via de sinalização a qual pertencem. Em soja foi relatada a presença de três ASRs, que foram denominadas GmASR1, GmASR2 e GmASR3. Este trabalho buscou identificar proteínas que interagem com a região promotora de GmASR3, assim como fatores que se ligam à proteína GmASR3. Após analise em bancos de dados, a região promotora em torno de 500pb a montante do códon de iniciação da transcrição foi obtida a partir de PCR realizado com o DNA genômico de soja (Glycine max, cultivar CD206) e clonado em plasmídeo pHIS2.1. Esta construção foi transformada em leveduras S. cerevisiae W303 para posterior triagem líquida de cDNAs que expressam fatores capazes de interagir com o promotor de GmASR3, a partir do método do mono-híbrido de leveduras. Foi verificado que a proteína GmASR3 possui fraca capacidade de transativação nas condições utilizadas, o que possibilitou a realização de experimentos de duplo-híbrido com o fim de identificar fatores que se ligam à proteína GmASR3. Os fatores que se ligam a GmASR3 foram obtidos através do método do duplo-híbrido de leveduras, utilizando para isso leveduras S. cerevisiae AH109 portadoras do plasmídeo pDest32 ao qual foi inserido a sequencia do cDNA de GmASR3. As triagens de mono e duplo-híbrido foram realizadas utilizando o método da triagem líquida em placas deep well. As colônias que foram consideradas portadoras dos fatores que interagem com o promotor ou com a proteína GmASR foram retransformados em E. coli Dh5α e enviados para sequenciamento.