Adição do complexo ciclodextrina-colesterol na criopreservação do sêmen caprino

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Santos, Madriano Christilis da Rocha
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Genética e Melhoramento de Animais Domésticos; Nutrição e Alimentação Animal; Pastagens e Forragicul; Doutorado em Zootecnia; UFV
• Palavras-chave em Português: Colesterol; Caprino; Sêmen; Ciclodextrina; Cholesterol; Goats; Semen; Cyclodextrin; CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::ZOOTECNIA
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/1869

Os objetivos do presente estudo foram: Capítulo 1 analisar, por meio da motilidade e do vigor espermáticos, a eficácia da adição de seis diferentes concentrações do complexo ciclodextrina-colesterol (CCC) em afetar a capacidade e a intensidade de movimentação das células espermáticas após o processo de congelamento do sêmen caprino, e avaliar a integridade e a funcionalidade da membrana plasmática do sêmen caprino descongelado. Capítulo 2 avaliar a integridade e a funcionalidade da membrana plasmática de espermatozoide após a adição do complexo ciclodextrina-colesterol (CCC) diluído em extensores à base de Tris-Glicerol ou à base de Tris-Etilenoglicol- gema de ovo ao sêmen caprino, e avaliar a forma de inclusão desse complexo (junto com o diluente ou pré-incubado por 15 minutos). No experimento descrito no Capítulo 1, cinco ejaculados foram coletados e fracionados de cinco reprodutores caprinos, saudáveis e com fertilidade comprovada. Uma fração foi utilizada como tratamento controle negativo (Tcontrole), onde não foi incluído o CCC. Adicionou-se nas demais alíquotas o diluente de congelamento (à base de Tris-glicerol) junto com o CCC nas concentrações de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; e 3,0 mg, que foram consideradas como os tratamentos: T0,5; T1,0; T1,5; T2,0; T2,5; e T3,0, respectivamente, com uma concentração espermática de [ ] = 200 * 106/mL. Após o congelamento foram feitas as avaliações de motilidade e vigor espermáticos, o teste hiposmótico e o teste supravital. No experimento descrito no Capítulo 2, foram coletados três ejaculados de cada um dos quatro bodes, totalizando 12 ejaculados. Cada ejaculado foi avaliado, e aqueles considerados aptos para o congelamento, segundo os parâmetros mínimos de motilidade e vigor espermáticos exigidos pelo CBRA (1998), foram fracionados em seis alíquotas de 350 * 106 espermatozoides (quantidade suficiente para sete doses de 50 * 106 de espermatozoides/palheta de 0,25 mL). Cada alíquota recebeu 1,0 mg de CCC, nos seguintes tratamentos: TGlicerol controle negativo para o diluente à base de Tris-glicerol sem CCC; TGlicerol + CCC para o diluente à base de Tris-glicerol + CCC; TGlicerol + CCC/pré-incubado CCC diluído em solução isosmótica ao sêmen (soro fisiológico) com 15 minutos de incubação antes da adição do diluente à base de Tris-glicerol; TEtilenoglicol controle negativo para o diluente à base de Tris-Etilenoglicol-gema de ovo; TEtilenoglicol + CCC para o diluente à base de Tris-Etilenoglicol-gema de ovo + CCC, TEtilenoglicol+ incubado CCC/pré- para o CCC diluído em solução isoosmótica ao sêmen (soro fisiológico) com 15 minutos de incubação antes da adição do diluente à base de Tris- Etilenoglicol-gema de ovo. Capítulo 1 O valor de &#945; foi de 5% para todos os parâmetros avaliados. Constatou-se que todos os tratamentos apresentaram diferenças (P<0,05) para o parâmetro motilidade espermática e que os tratamentos T1,0 e T0,5 evidenciaram ser os maiores valores (33,45% ± 1,07 e 32,59% ± 0,98, respectivamente) em relação a 28,62% ± 1,05 do Tcontrole e estando acima do valor mínimo de 30%, preconizado pelo CBRA (1998) para sêmen descongelado. A motilidade espermática dos tratamentos T1,5; T2,5; T2,0; e T3,0 foram: 27,41% ± 0,96; 26,55% ± 0,94; 25,89% ± 0,99; e 25,17% ± 1,06, respectivamente. O vigor espermático não variou (P>0,05) entre tratamentos, sendo: T controle (2,1 ± 0,07), T0,5 (2,24 ± 0,07), T1,0 (2,4 ± 0,08), T1,5 (2,28 ± 0,07), T2,0 (2,13 ± 0,07), T2,5 (2,19 ± 0,07) e T3,0 (2,26 ± 0,09). O percentual de células com membrana funcional pelo teste supravital em T0,5 (41,5 ± 0,85) foi superior (P<0,05) ao do Tcontrole (37,7 ± 0,94), não tendo havido variações (P>0,05) nos percentuais médios entre os tratamentos: T2,0; T2,5; T1,0; e T3,0 (38,06 ± 0,91; 38,06 ± 1,0; 36,33 ± 0,81; 35,54 ± 0,81; e 34,77 ± 1,13, respectivamente), em relação ao do Tcontrole. O percentual de membrana funcional do tratamento T1,5 (30,65 ± 0,98) foi inferior (P<0,05) ao dos demais tratamentos. Não foram observadas diferenças (P>0,05) na integridade de membrana plasmática por meio do teste hiposmótico para Tcontrole (28,55 ± 1,01), T2,5 (24,47 ± 0,76), T0,5 (24,21 ± 0,82), T1,0 (23,74 ± 0,85), T1,5 (21,92 ± 1,18), T2,0 (21,24 ± 0,87) e T3,0 (19,68 ± 0,88), pelo teste de Kruskal-Wallis. Capítulo 2 O valor de &#945; foi de 5% para todos os parâmetros avaliados. As médias da motilidade espermática diferiram (P<0,05) entre todos os tratamentos TGlicerol + CCC/pré-incubado (37,08 ± 2,17), TGlicerol + CCC (35,00 ± 1,51), TGlicerol (29,55 ± 2,81), TEtilenoglicol+CCC/pré-incubado (29,17 ± 4,52), TEtilenoglicol + CCC (25,83 ± 3,98) e TEtilenoglicol (23,64 ± 4,10). O vigor espermático do sêmen descongelado não foi afetado pelos tratamentos aplicados (P>0,05), apresentando as seguintes médias TEtilenoglicol + CCC/pré-incubado (2,96 ± 0,31), TEtilenoglicol + CCC (2,91 ± 0,12), TGlicerol + CCC/pré-incubado (2,75 ± 0,2), TEtilenoglicol (2,59 ± 0,35), TGlicerol + CCC (2,29 ± 0,18), TGlicerol (2,22 ± 0,18). Não foram observadas diferenças (P>0,05) nos percentuais médios para integridade de membrana pelo teste hiposmótico dos tratamentos TGlicerol + CCC/pré-incubado (52,0 ± 4), TEtilenoglicol+ CCC/pré-incubado (49,65 ± 5,9), TGlicerol + CCC (45,05 ± 4,83), TGlicerol (44,8 ± 2,31), TEtilenoglicol (44,39 ± 4,66) e TEtilenoglicol + CCC (39,6 ± 4,96). Diferenças não foram observadas (P>0,05) entre as médias dos tratamentos TEtilenoglicol + CCC/pré- incubado (29,0 ± 3,82), TEtilenoglicol + CCC (26,96 ± 4,73), TGlicerol + CCC/pré-incubado (24,5 ± 4,2), TGlicerol + CCC (23,54 ± 4,49), TGlicerol (20,79 ± 3,35), TEtilenoglicol (19,45 ± 4,08), para funcionalidade da membrana plasmática, pelo teste supravital. Foram observadas diferenças (P<0,05) na produção de ATP na bainha mitocondrial nos tratamentos TEtilenoglicol + CCC (62,92 ± 8,34), TEtilenoglicol+ CCC/pré-incubado (62,72 ± 8,79), TEtilenoglicol (59,19 ± 9,57), TGlicerol (11,64 ± 5,43) e TGlicerol + CCC + CCC/pré-incubado (11,92 ± 6,89), TGlicerol (7,76 ± 3,31). Foram constatadas diferenças (P<0,05) na integridade de membrana acrossomal nos tratamentos TEtilenoglicol (78,19 ± 5,82), TEtilenoglicol+ CCC/pré-incubado (74,43 ± 6,31), TEtilenoglicol + CCC (70,68 ± 5,77), TGlicerol (47,06 ± 4,31), TGlicerol + CCC (46,88 ± 6,58) e TGlicerol + CCC/pré-incubado (44,6 ± 8,57). Não foram encontradas diferenças (P>0,05) na integridade de membrana plasmática por meio das sondas fluorescentes (IP Dietilcarboxifluorosceína) nos tratamentos TGlicerol (63,98 ± 8,4), TGlicerol (63,08 ± 9,05), TGlicerol + CCC/pré-incubado + + CCC (52,24 ± 9,47), T5 (52,09 ± 10,88), TEtilenoglicol+ CCC/pré-incubado (44,37 ± 8,96) e TEtilenoglicol (37,19 ± 10,81). Capítulo 1 Conclui-se que a adição de 0,5 mg do CCC ao sêmen com a concentração espermática de 200 * 106 /mL diminui as perdas de integridade e funcionalidade da membrana plasmática. No entanto, a adição de 1,0 mg de CCC ao sêmen com a concentração espermática de 200 * 106 /mL propicia melhor resultado na motilidade espermática após o descongelamento do sêmen. Capítulo 2 Diante dos resultados observados, conclui-se que a adição de 1,0 mg do complexo ciclodextrina-colesterol no sêmen com a concentração espermática de 200 * 106 /mL não altera a integridade e/ou a funcionalidade da membrana plasmática do espermatozoide caprino. O diluidor à base de Tris-gema de ovo- etileno glicol não altera a funcionalidade da membrana plasmática ou o vigor espermático,embora influencie positivamente a integridade da membrana acrossomal afete negativamente a motilidade espermática do sêmen descongelado, comparado ao diluente à base de Tris-Glicerol. A pré-incubação do sêmen com o complexo ciclodextrina-colesterol não altera as características de vigor espermático, nem a integridade e a funcionalidade da membrana plasmática dos espermatozoides, mas afeta positivamente a motilidade espermática do sêmen descongelado.