Caracterização fisiológica e genética do Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 desprovido da capacidade de imunoestimulação

• Ano de defesa: 2004
• Autor(a) principal: Teixeira, Leonardo Maestri
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa
• Palavras-chave em Português: Lactobacillus H2b20; Transposase; Sequência de Inserção; Instabilidade; Probiótico; S-layer; Ciências Agrárias
• Link de acesso: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/10689

Foi feita a caracterização de um mutante espontâneo do Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 que mostrou-se desprovido da capacidade de imunoestimulação e também a investigação do possível papel da seqüência de inserção ISLdH2b20 nessa mutação. A confirmação da identidade genética de L. delbrueckii UFV H2b20 com a do mutante desprovido da capacidade de imunoestimular o hospedeiro foi realizada por análise dos perfis de PCR-DGGE. Ambas bactérias apresentaram na microscopia eletrônica de transmissão característica peculiar do H2b20, a de formar bastonete alongado quando na fase estacionária. As células do mutante mostraram-se com diâmetro maior do que as da cultura do L. delbrueckii UFV H2b20, porém as velocidades especificas máximas de crescimento (μ max ) foram iguais. As células do mutante sofrem lise mais rápida do que as da cultura original selvagem quando em presença de baixas concentrações de mutanolisina, no entanto, o perfil de lise é idêntico em presença de lisozima. A hidrofobicidade de superfície das células, determinada pelo teste de MATH, é maior nas células da cultura original do L. delbrueckii UFV H2b20. Os perfis de proteínas de superfície não se distinguem quanto ao número e posição das bandas em SDS-PAGE, contudo a banda referente à proteína de aproximadamente 36kDa apresentou mais proteína nos extratos do tipo selvagem do que a do mutante. O mutante apresentou uma maior quantidade de proteínas em quase todas as outras bandas, com destaque para duas bandas, 60 kDa e 75 kDa. O estudo de distribuição da ISLdH2b20 nos isolados selvagem e mutante, feito por análise de Southern, mostrou mesmo perfil de distribuição dessa seqüência de inserção nos dois solados. Os resultados indicam a possível participação de uma proteína de 36 kDa no processo de imunoestimulação do H2b20, possivelmente da camada S, e que a instabilidade desse, quanto à capacidade de imunoestimulação, não tem a participação direta da seqüência de inserção ISLdH2b20 em particular.