Caracterização funcional de uma provável nucleoporina que interage com a proteína NSP de geminivírus

• Ano de defesa: 2006
• Autor(a) principal: Fontenelle, Mariana Rodrigues
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Bioquímica e Biologia molecular de plantas; Bioquímica e Biologia molecular animal; Mestrado em Bioquímica Agrícola; UFV
• Palavras-chave em Português: Nucleoporina; Proteína NSP; Geminivírus; Nucleoporin; NSP protein; Geminivirus; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/2399

A família Geminiviridae é uma diversa família de vírus de planta. O Cabbage leaf curl virus (CaLCuV) do gênero Begomovirus possui dois componentes genômicos de DNA fita simples, DNA-A e DNA-B. O DNA-A é requerido para a replicação, ativação transcricional e encapsidação do vírus. O DNA-B é requerido para movimento, sendo que a proteína NSP, codificada pelo mesmo, transporta o DNA viral do núcleo para o citoplasma. Já foi demonstrado que NSP interage com proteínas do hospedeiro, como uma proteína receptora Ser/Tre quinase, denominada NIK ( NSP-interacting kinase ). Nesse estudo foi realizado uma triagem de proteínas que interagem com NSP de CaLCuV, através de um sistema duplo híbrido em leveduras, utilizando uma biblioteca de cDNA de Arabidopsis, e foi isolada uma nucleoporina-like, referida como NAP ( NSP-Associated Protein ). Além disso, foi comprovado que a interação NAP-NSP também ocorre in vitro. A proteína completa, codificada pelo gene At4g13350 possui dois homólogos em Arabidopsis com funções ainda desconhecidas, o At1g08680 e At4g32630. Foi identificado um homólogo em humanos, a proteína hRip, que interage com a proteína Rev de HIV. Para se entender a importância da interação de NAP-NSP, foi identificado um mutante para o gene NAP e foram selecionadas linhagens mutantes homozigotas de Arabidopsis por PCR. A inativação do gene NAP foi confirmada por um RT-PCR, comprovando ser um alelo nulo. Plantas de Arabidopsis selvagens da linhagem Col-0 e mutantes nap foram inoculadas com CaLCuV DNA-A e DNA-B. Ambas as linhagens Col-0 e nap desenvolveram os sintomas típicos de CaLCuV com intensidades semelhantes. A inativação do gene NAP parece não influenciar na infecção do vírus CaLCuV em Arabidopsis, talvez pela presença de homólogos que possam estar desempenhando o papel de NAP ou talvez pela interação NAP-NSP não ser essencial na infecção viral. Estudos em plantas superexpressando o gene NAP foram realizados, constatando que essas plantas apresentaram um discreto aumento na susceptibilidade ao vírus, mostrando sintomas mais severos e maior número de plantas infectadas, comparadas às plantas selvagens.