Caracterização fisiológica de mutantes Kluyveromyces lactis ∆hap1 e ∆rox1 sob aerobiose e hipoxia

• Ano de defesa: 2005
• Autor(a) principal: Macêdo, Cláudia Souza Macedo
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa
• Palavras-chave em Português: Genoma Funcional; Kluveromyces lactis; Levedura; Metabolismo oxidativo e Oxidorredutivo; ROX1 e HAP1; Clonagem; Ciências Agrárias
• Link de acesso: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/10694

Na busca de novos resultados para elucidar o papel de HAP1 e ROX1, que codificam um ativador do metabolismo oxidativo e um repressor do metabolismo oxidorredutivo, respectivamente, na levedura Crabtree negativa Kluyveromyces lactis cuja versatilidade metabólica pode ser explorada em vários campos da biotecnologia, inicialmente, foi identificado um gene ortólogo ROX1 à S. cerevisiae na seqüência genômica de K.lactis. O gene KlROX1 possui 40% de identidade daquele presente em S. cerevisiae e um motif característico do domínio HMG (High Mobility Group). Com base nessa seqüência uma linhagem mutante com deleção de ROX1 foi construída e confirmada. O fenótipo URA + e rox1 - dos transformantes obtidos, K.lactis ∆rox1::URA3, foram 100% estáveis sob condição seletiva. O gene putativo ROX1 de K.lactis teve a sua função em resposta ao oxigênio confirmada em culturas de K. lactis sob regime contínuo e desrepressão por glicose, pois, a deleção de ROX1 induziu a um aumento no nível do transcrito do gene hipóxico HEM13. A análise dos produtos do metabolismo permitiu inferir que a deleção do gene ROX1 em K. lactis aumentou a capacidade fermentativa dessa levedura sob aerobiose e de desrepressão catabólica. A investigação em culturas K. lactis ∆hap1 submetidas ao cultivo contínuo aeróbico sob desrepressão por glicose revelou um fenótipo relacionado ao metabolismo oxidorredutivo, ou seja, K. lactis ∆hap1 é mais fermentativa levando a diversidade de metabólitos em torno do piruvato. A proposta da via de regulação parcial negativa controlando a expressão de HEM13 foi confirmada nas culturas K. lactis.