Participação da proteína tirosina quinase src e do óxido nítrico nas vias de sinalização celular estimuladas por estrógeno na linhagem MCF-7 obtida de tumor humano de mama

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Rosa, Heloisa [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Breast cancer; Estrogen receptor; SRC kinase; Nitric oxide synthase endothelial; Nitric oxide; Câncer de mama; Receptor de estrógeno; Óxido nítrico sintase tipo III; Óxido nítrico; Neoplasias da mama
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2661951; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47131

O receptor de estrógeno tem um papel central no câncer de mama responsivo a estrógeno. Evidências experimentais e clínicas sugerem ainda uma participação do óxido nítrico (NO) e das enzimas óxido nítrico sintases (NOS) na biologia do câncer de mama. A S-nitrosilação de proteínas sinalizadoras como Src quinase, mediada pelo NO, é importante para a progressão do tumor. O objetivo do presente estudo foi descrever uma via de sinalização não-nuclear estimulada por estrógeno que envolve a ativação de óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) e de Src quinase em células de carcinoma mamário MCF-7. Para tanto, nós desenvolvemos uma ?isca? molecular a partir da clonagem e expressão da proteína Src quinase recombinante humana contendo uma cauda de Histidina (6xHis-Src). Células MCF-7/6xHis-Src foram tratadas com diferentes concentrações de 17?-estradiol (E2) durante 0, 2, 8, 16 ou 24 horas. Ensaio de Imunofluorescência revelou ativação de Src após tratamento com 100 nM E2. Análise de Western Blotting confirmou que a atividade de Src foi estimulada com 100 nM E2 alcançando sua atividade máxima após 8 e 24 horas de incubação. Níveis intracelulares de NO aumentaram após 24 horas de tratamento das células com 100 nM E2. A S-nitrosilação de Src foi estimulada com 10 nM E2 e inibida por pré-incubação das células com o inibidor de Src, PP1. E2 estimula a proliferação celular, que é inibida por pré-incubação com Fulvestranto (antagonista do receptor de estrógeno), PP1 ou L-N5-(1-Iminoethyl) ornithine (L-NIO) (inibidor da eNOS). Análise baseada em Espectrometria de Massas revelou a presença de proteínas associadas com a proliferação celular após tratamento das células com E2; a pré-incubação das células com inibidores revelou a presença de proteínas associadas com repressão transcricional. Nós concluímos que NO, eNOS e Src quinase desempenham um papel importante na via de sinalização não-nuclear estimulada por E2 associada à proliferação das células MCF-7