Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2023 |
| Autor(a) principal: |
Lima, Verônica Aparecida de [UNIFESP] |
| Orientador(a): |
Não Informado pela instituição |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal de São Paulo
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Palavras-chave em Português: |
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| Link de acesso: |
https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/67264
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Resumo: |
A doença COVID-19 responsável pela pandemia causada pelo vírus SARS-CoV-2 deixou mais de 6,6 milhões de mortes no mundo. O vírus SARS-CoV-2 é um betacoronavírus que pertence a família coronaviridae, possui aproximadamente 80% de similaridade com SARS-CoV, 51,8% com MERS-CoV e aproximadamente 96,2% com SARS-CoV de morcego RaTG13. O SARS-CoV-2 possui quatro proteínas estruturais e dezesseis proteínas não estruturais. A proteína S é uma das proteínas estruturais exposta na sua superfície e é o principal alvo para produção de vacinas e de anticorpos neutralizantes por conter o domínio de ligação ao receptor (RBD) responsável pela entrada do vírus em células humanas. A proteína S forma no vírus um trímero que é capaz de se ligar enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2) promovendo a internalização da partícula viral pela célula. A maioria dos estudos de interação da porção RBD com o receptor tem sido feita com o fragmento monomérico contendo esta porção. Neste estudo expressamos em células HEK293 de maneira constitutiva e estável uma proteína recombinante contendo uma sequência sinal de imunoglobulina, a porção RBD seguida de uma região indutora de trimerização do bacteriófago T4 e uma sequência de 6 histidinas. Neste trabalho descrevemos a expressão da proteína e sua liberação no sobrenadante das células HEK293. A proteína foi purificada por coluna de Ni-agarose e cromatografia de exclusão e apresentou uma massa molecular de 135 kDa com uma estrutura secundária semelhante ao RBD monomérico. Análise em eletroforese em gel de poliacrilamida e SDS com e sem redutores foram compatíveis com a existência da forma de uma proteína multimérica, apresentando-se como trímeros e hexâmero identificados após “crosslinking”. A proteína purificada foi reconhecida pelo receptor ACE2 e gerou anticorpos com altos títulos (1:10000) em camundongos com a capacidade de inibir a ligação de ACE2-biotinilada à subunidade S1 e neutralizar a entrada do vírus, principalmente da linhagem Wuhan em células. Estes resultados agregam ao arsenal de combate à COVID-19, um possível imunógeno ou antígeno para diagnóstico. |
