Indução de diferenciação causa mudança na localização subcelular de Runx em células-tronco neurais

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Massinhani, Fernando Henrique [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Células-tronco neurais; Diferenciação celular; Fatores de transcrição; Runx
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2357930; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/48252

Os membros da família Runx são fatores de transcrição, evolutivamente conservados, que regulam a expressão de genes envolvidos na diferenciação e na progressão do ciclo celular, podendo atuar como ativadores ou repressores transcricionais. Assim, o objetivo desta tese foi verificar se a expressão dos membros da família Runx (Runx1, 2 e 3) por células-tronco neurais da zona subventricular (SVZ) de camundongos adultos está relacionada com a diferenciação dessas células em neurônios. Inicialmente, observamos a expressão gênica e proteica dos membros da família Runx por PCR e Western blotting respectivamente, utilizando células-tronco neurais cultivadas como neurosferas. Em seguida, realizamos imunocitoquímica com neurosferas mantidas em cultura por 1, 7 e 14 dias após a adesão ao substrato, para promover a diferenciação, e analisamos a localização dos RUNX. Por último, investigamos a presença dos componentes da via Notch-Delta na SVZ e sua localização em relação a RUNX3 em célula-tronco neurais. Verificamos que os três RUNX são expressos e apresentam padrão semelhante de localização, sendo encontrados predominantemente no núcleo de células cultivadas por até 7 dias e no citoplasma após 14 dias in vitro (d.i.v.). Avaliamos a localização de RUNX3 em diferentes tipos celulares, identificados por marcadores específicos para células-tronco, neuroblastos e neurônios. Foi observada predominância de marcação nuclear até 7 d.i.v. e citoplasmática com 14 d.i.v., independentemente do tipo celular. Também foi identificada presença de HES1, TLE1 e NOTCH1 na SVZ e coimunolocalização com RUNX3 em células-tronco neurais. A partir dos resultados obtidos até o momento é possível afirmar que os membros da família Runx são expressos por células-tronco neurais e que, possivelmente, essa expressão está relacionada como o processo de diferenciação destas células em neurônios. Além disso, foi observado que os membros da via Notch-Delta (HES1, TLE1 e NOTCH porção citoplasmática) colocalizam com RUNX3.