Biomarcadores moleculares na cardiomiopatia diabética: uma abordagem in silico, in vivo e in vitro

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Lopes, Mariana Borges
• Orientador(a): Luchessi, André Ducati
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal do Rio Grande do Norte
• Programa de Pós-Graduação: PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Cardiomiopatia diabética; miRNAs miméticos; rno-miR-214-3p; Pla2g2a; Il6; Terapia gênica
• Link de acesso: https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/31535

A hiperglicemia causada pelo Diabetes mellitus (DM), acarreta alterações moleculares na expressão de RNAm, miRNAs e citocinas inflamatórias, que estão relacionadas ao aparecimento de alterações estruturais e funcionais características da CMD. O presente estudo buscou, através de análise in silico, RNAms e miRNAs envolvidos na CMD e validar, in vivo e in vitro, a via de regulação do rno-miR-214-3p e seu possível RNAmalvo, a fosfolipase A2 do grupo IIA (Pla2g2a) em condições de hiperglicemia. Assim, bancos de dados de microarray do Gene Expression Omnibus (GSE4745 e GSE44179) e ferramentas como Ingenuity Pathway Analysis e TargetScan 7.1 foram usados para buscar possíveis interações miRNA-RNAm relacionadas à CMD. In silico, foi observado que a expressão de Pla2g2a estava aumentada e de seu possível miRNA regulatório rno-miR214-3p diminuída no ventrículo esquerdo (VE) de ratos diabéticos. Através de abordagens in vivo e in vitro utilizando amostras de VE de ratos Wistar com diabetes induzido por estreptozotocina (40 mg/kg, i.v.) e cultura de células H9c2 em condições normoglicêmicas (NG, 5,5 mmol/L de glicose), hiperglicêmicas (25 mmol/L de glicose) e transfectadas com rno-miR-214-3p mimético em meio hiperglicêmico buscamos validar esses resultados encontrados utilizando ferramentas de predição. RNA total e proteínas foram extraídos das amostras e a expressão de rno-miR-214-3p, Pla2g2a e Il6 avaliada por RT-qPCR e/ou Western Blot. In vivo, observou-se aumento na deposição de colágeno no miocárdio dos animais diabéticos (p = 0,023) caracterizando o início de um processo fibrótico. A hiperglicemia reduziu a expressão do rno-miR-214-3p (p = 0,043 e p = 0,020) e aumentou de Pla2g2a (p = 0,016 e p = 0,043) e Il6 (p = 0,016 e p = 0,011) in vivo e in vitro, respectivamente. A expressão das proteínas sPLA2-IIA (p = 0,011) e IL-6 (p = 0,011) aumentou no VE dos ratos diabéticos. Houve correlação positiva entre a expressão de Pla2g2a, Il6 e hiperglicemia (p < 0,05). O uso de mimético de rno-miR-214-3p em células H9c2, levou à redução na expressão de Pla2g2a e Il6 em meio hiperglicêmico (mimético a 50 nM/24 h). Sendo assim, observamos que a expressão de rno-miR-214-3p está diminuída e de seu gene alvo Pla2g2a aumentada no DM nas três abordagens propostas pelo presente estudo. Além disso, o aumento da expressão de rno-miR-214-3p através do uso de miméticos ocasionou a diminuição na expressão de Pla2g2a e também de Il6, indicando uma participação desse miRNA no controle da inflamação causada pelo DM.