Avaliação do potencial anticoagulante e antitrombótico de polissacarídeos nativos e quimicamente sulfatados de basidiomicetos

• Ano de defesa: 2011
• Autor(a) principal: Gracher, Ana Helena Pereira
• Orientador(a): Iacomini, Marcello, 1947-
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Teses; Basidiomicetos; Polissacarideos; Anticoagulantes; Heparina
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1884/25025

Resumo: A heparina e um importante agente terapeutico para tratamento e profilaxia da trombose. No entanto, sua fonte e limitada e alguns problemas sao associados ao seu uso, tais como hemorragias e trombocitopenia induzida por heparina. Modificacoes quimicas de polissacarideos, como a sulfatacao, tem atraido interesse, pois aumentam a semelhanca estrutural com a heparina. Na busca de alternativas a heparina, tres polissacarideos isolados de basidiomicetos e previamente caracterizados, foram quimicamente sulfatados: uma £]-D-glucana linear (1„_6)- ligada de Agaricus blazei (GAb-S1), uma £]-D-glucana com cadeia principal (1„_3)- ligada substituida em O-6 por unidades de £]-D-glucopiranose de Pleurotus florida (GPf-S1 e GPf-S2, primeiro e segundo ciclo de sulfatacao, respectivamente), uma fucomanogalactana com uma cadeia principal de £\-D-galactopiranose (1„_6) ligadas e substituidas em O-2 por terminais nao redutores de £\-L-fucopiranose e ƒÒ-Dmanopiranose de Lentinus edodes (FmgLe-S1) e um manogalactana com cadeia principal de £\-D-galactopiranose (1„_6) ligada, substituidas em O-2 por ƒÒ-Dmanopiranose e parcialmente 3-O-metiladas de Pleurotus ostreatoroseus (MgPr-S1). Os graus de substituicao (DS) foram eterminados, sendo: 1,38 (GAb-S1), 0,57 (GPf-S1), 0,60 (GPf-S2), 2,04 (FmgLe-S1) e 1,31 (MgPr-S1). Os espectros de RMNC 13 de todos os polissacarideos sulfatados apresentaram um maior numero de sinais do que os dos polissacarideos nativos e as analises de metilacao sugerem substituicao nos grupos OH-6 (terminais nao-redutores), OH-4 e OH-3. A acao anticoagulante dos polissacarideos nativos e sulfatados foi avaliada in vitro pelos testes de aPTT e TT, com concentracoes crescentes (5 a 100 £gg/ml). Os polissacarideos nativos nao apresentaram acao anticoagulante e todos os polissacarideos sulfatados apresentaram uma atividade dose-dependente. GAb-S1 apresentou uma maior atividade anticoagulante, comparada aos outros polissacarideos testados, enquanto que GPf-S1 e GPf-S2 nao foram capazes de inibir completamente a coagulacao do plasma pelo teste de aPTT. Todos os polissacarideos sulfatados foram capazes de suprimir a coagulacao do plasma pelo teste de TT na maior concentracao (100 £gg/ml). No modelo in vivo de trombose venosa, GAb-S1 apresentou um efeito pro-coagulante em altas doses e inibiu em 72% a trombose na dose de 0,250 mg/kg. MgPr-S1 inibiu a formacao de trombo em uma maneira dose-dependente e com uma dose de 6 mg/kg a inibicao foi completa. GPf-S2 tambem teve uma forte atividade antitrombotica e na dose de 1,5 mg/kg suprimiu em 87% a geracao de trombo. MgPr-S1 apresentou uma menor tendencia em causar hemorragia na concentracao de 6 mg/kg, comparado com a heparina e GPf-S2 na concentracao de 1,5 mg/kg nao alterou o volume de sangue perdido (valores iguais ao grupo salina). Os polissacarideos tambem foram avaliados quanto a sua influencia sobre a agregacao plaquetaria estimulada por ADP e trombina. GPf- S2 e MgPr-S1 inibiram, respectivamente, em 54% e 100% a gregacao plaquetaria estimulada por ADP. Todos os polissacarideos suprimiram a agregacao de plaquetas estimuladas por trombina, na dose de 0,200 £gg/ml. FmgLe-S1 estimulou a agregacao plaquetaria, sem outro agonista. Todos os polissacarideos inibiram a trombina na presenca de AT e HCII. No entanto, GAb-S1 e MgPr-S1 apresentaram uma maior atividade mediada pelo HCII, inibindo a atividade da trombina, em uma menor concentracao que a heparina. A maioria dos polissacarideos sulfatados nao apresentou uma forte atividade inibitoria mediada pela AT contra o fator Xa, porem em doses mais elevadas GPf-S1 e GPf-S2 foram capazes de inibir esta serinoprotease. Estes resultados ilustram a variedade de respostas sobre a coagulacao sanguinea geradas pelos polissacarideos sulfatados.