Pneumonia enzoótica suína: isolamento do agente e expressão de antígeno recombinante em pichia pastoris

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Gomes, Charles Klazer
• Orientador(a): Dellagostin, Odir Antônio
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Pelotas
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
• Departamento: Centro de Desenvolvimento Tecnológico
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Biotecnologia; Vacinas; Mycoplasma hyopneumoniae; Suínos; PES; Quimera sintética; Pichia pastoris
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::PATOLOGIA ANIMAL::PATOLOGIA CLINICA ANIMAL
• Link de acesso: http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/9022

O Mycoplasma hyopneumoniae é o agente causador da Pneumonia Enzoótica Suína (PES), uma das principais doenças respiratórias dos suínos. A PES é uma doença que afeta suínos no mundo todo, causando grandes perdas econômicas para a indústria suinícola. A vacinação é o método mais eficaz para o controle da PES. As vacinas comerciais disponíveis no mercado são bacterinas, produzidas a partir da bactéria inteira inativada e conferem apenas proteção parcial aos suínos. Além das bacterinas, proteínas recombinantes de M. hyopneumoniae produzidas em Escherichia coli vem sendo testadas como potenciais alvos vacinais. Este trabalho teve dois objetivos principais: (1) a obtenção de isolados de M. hyopneumoniae a partir de amostras de pulmão coletadas em frigorífico, visando conhecer a diversidade genética das cepas circulantes no RS; e (2) a expressão de uma quimera, compostas por três antígenos de M. hyopneumoniae (P42, R1 e NrdF) fusionados a um adjuvante de mucosa, na levedura Pichia pastoris, visando a obtenção de uma proteína expressa em grande quantidade e com um dobramento diferenciado da proteína expressa em E. coli. Para o isolamento, 62 amostras de pulmão foram coletadas, processadas e cultivadas. Os isolados de M. hyopneumoniae obtidos apresentaram contaminação com outros Mycoplasma spp. Não foi possível obter isolados puros para proceder com o estudo de diversidade genética. Para a expressão da quimera em Pichia pastoris, o gene sintético da quimera foi eficientemente clonado na cepa KM71H, e a expressão dessa proteína foi observada por Western blot. Tanto o isolamento do agente quanto a expressão de antígenos recombinante são passos importantes para o desenvolvimento de uma vacina mais efetiva para o controle da PES.