Avaliação da inibição de bombas de efluxos em linhagens de Staphylococcus aureus por substâncias sintéticas de origem natural

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: TINTINO, Saulo Relison
• Orientador(a): BALBINO, Valdir de Queiroz
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Pernambuco
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós Graduação Rede Nordeste de Biotecnologia - RENORBIO
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Staphylococcus aureus; Bomba de efluxo; Expressão gênica
• Link de acesso: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/32280

A bactéria Staphylococcus aureus é um micro-organismo que é comumente citado comosendo um importante patógeno de infecções hospitalares. Os mecanismos de resistências presentes em S. aureus são vários, dentre estes estão aqueles reduzem as concentrações de antibiótico dentro da bactéria, como as bombas de efluxos. Diversos compostos naturais sejam extratos, óleos ou compostos isolados, já se mostraram capazes de inibir o efluxo bacteriano. O ácido tânico um dos compostos utilizados no presente estudo é um composto natural de plantas, que apresenta diversas atividades biológicas comprovadas. As vitaminas lipossolúveis são substâncias naturais, também conhecidos por apresentar diversas atividades biológicas e efeitos benéficos para a saúde humana. Tendo vista o potencial biológico desses compostos, o presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito inibidor sobre o funcionamento de bomba de efluxo dessas substâncias naturais em cepas de Staphylococcus aureus multirresistentes. As cepas utilizadas de S. aureus usadas foram: RN4220 portadora do plasmidio pUL5054 que apresenta o gene responsável por codificar a proteína de efluxo MsrA que age sobre macrolidios; IS-58 dotada do plasmídeo PT181 portador do gene da proteína de efluxo de tetraciclinas TetK; 1199B cepa resistente a fluroquinolonas hidrofílicas via proteína de efluxo NorA e a cepa selvagem 1199 referente a mesma. Foi realizado o ensaio de concentração inibitória mínima de todas as substâncias de origem natural sintéticas, utilizando o método de microdiluição em caldo. Para verificar o efeito de redução do CIM do brometo de etídeo e do antibiótico, foi utilizado inóculos obtidos de placas incubadas em estufa bacteriológica por 24h a 37ºC com o repique do estoque. Após esse período foi utilizado inóculos em solução salina de acordo com Mcfarland 0,5 que corresponde a 105UFC. Os resultados dos testes foram feitos em triplicatas e como média geométrica. Na análise estatística foi utilizada ANOVA de uma via, seguida do pos teste hoc Tukey usando GraphPad Prism 5.0. Com relação à atividade inibitória mínima o ácido tânico, o mesmo não apresentou resultado clinicamente relevante com valor ≥1024 μg/mL. Entretanto, de acordo com os resultados do presente estudo, o ácido tânico foi capaz de reduzir diferentes sistemas de efluxo, igual ou melhor que inibidores conhecidos de bomba de efluxo. Resultado observado pela ação tanto sobre o brometo de etídeo como sobre os antibióticos. Entre as vitaminas lipossolúveis analisadas, a menadiona além de mostrar atividade clinicamente relevante frente às cepas testadas, esta também apresentou capacidade de reduzir o efuxo com mais eficiência que as demais vitaminas, sendo principalmente frente às cepas RN4220 e 1199B. Acredita-se que o composto ácido tânico, possa ter seu efeito sobre as bombas de efluxo através da ligação em sítios de interação dessa proteína, caracterizando uma ação direta ou também pode ter atuado indiretamente pela retenção de ferro necessário para atividade da bomba efluxo. Com relação a vitaminas K, é possível que a inibição do efluxo observado com essa vitamina lipossolúvel, seja responsável pela desestabilização de membrana, e como consequência desse efeito alterar a funcionalidade da bomba de efluxo, já que a mesma é uma proteína de membrana.