Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: |
2015 |
Autor(a) principal: |
Giuliani, Liane de Rosso |
Orientador(a): |
Martins, Almir de Sousa |
Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
Tipo de documento: |
Dissertação
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Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
Idioma: |
por |
Instituição de defesa: |
Não Informado pela instituição
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Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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Departamento: |
Não Informado pela instituição
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País: |
Não Informado pela instituição
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Palavras-chave em Português: |
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Link de acesso: |
https://repositorio.ufms.br/handle/123456789/2569
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Resumo: |
Introdução: FOP é uma doença genética autossômica dominante complexa e rara, caracterizada por anomalias congênitas esqueléticas sendo o halux valgo uma característica patognomonica. Evolui com ossificação heterotópica progressiva, formando um exo esqueleto até a adolescencia. Os portadores apresentam mutação em heterozigose (c.617G>A, p.R206H) no gene ACVR1, no cromossomo 2q23-24. Mutações no ACVR1 são de ganho de função. A substituição da arginina pela histidina na mutação, cria uma alteração alostérica dentro do domínio do receptor, pH-sensível, ativando a via de sinalização das BMPs independentemente da BMP. Portanto a fisiopatologia da FOP envolve o desequilíbrio da via de sinalização das BMPs e sua interação complexa com múltiplas vias moleculares e do sistema imunológico. Experimentos in vitro, de cultivo primário de leucócitos de pacientes não têm sido explorados e deverão ser importantes modelos na avaliação da via gatilho da doença e de sua interação com medicamentos utilizados no controle das crises agudas. Objetivos: Determinar um modelo experimental para o silenciamento da expressão gênica do ACVR1 (R206H) em cultura de PBMC de pacientes com FOP obtidas por cultivo primário e avaliar o efeito do siRNA sobre a expressão de ACVR1 e BMP4. Métodos: Amostras de sangue total foram coletadas para cultivo de células mononucleares (PBMC) de doze voluntários (6 portadores de FOP e 6 controles sadios). Células foram tratadas com siRNA para ACVR1mutado e siRNA para ACVR normal, carreadas por nanopartículas de carbono. O RNA total extraído pelo Stat60, submetido a RT e PCRtr. Teste t não pareado foi utilizado para avaliar a expressão gênica. Resultados e Conclusão: O presente trabalho mostra que estudos moleculares de silenciamento gênico utilizando o modelo de PBMC e nanopartículas de carbono, é viável. Como é um modelo relativamente simples permitirá futuros estudos na compreensão da fisiopatologia da FOP. Observamos no presente trabalho que houve o silenciamento do gene alvo ACVR1, embora o mecanismo pelo qual o ACVR1 ficou superexpresso não tenha ficado muito claro. Mas quando observamos a expressão do gene ACVR1 e analisamos em conjunto com a expressão de BMP4, percebemos que ocorreu uma modulação quando as células foram tratadas com RNAi. |