Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2016 |
| Autor(a) principal: |
Farani, Priscila Silva Grijó
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| Orientador(a): |
Pinto, Priscila de Faria
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| Banca de defesa: |
Goliatt, Priscila Vanessa Zabala Capriles
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Souza, Theo Luiz Ferraz de
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| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas
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| Departamento: |
Faculdade de Farmácia
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/9069
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Resumo: |
As ectonucleotidases compreendem um grupo de famílias de enzimas que participam da hidrólise extracelular de nucleotídeos, podendo estar localizadas na superfície celular, solúveis no meio intersticial ou nos fluidos corporais. As NTPDases (EC 3.6.1.5) são enzimas pertencentes a uma família de proteínas amplamente distribuída nos organismos e que têm como característica em comum a habilidade de hidrolisar nucleotídeos di- e trifosfatados (ADP e ATP), na presença de concentrações milimolares de Ca+2 e Mg+2. A apirase de batata (Solanum tuberosum) foi a primeira enzima da família das ectonucleotidases a ser purificada e sua isoforma solúvel é pode ser obtida em elevado grau de rendimento e pureza utilizando métodos convencionais de purificação e assegurando alta reprodutibilidade em ensaios farmacológicos e imunológicos. As NTPDases estão envolvidas em vários processos fisiopatológicos como em respostas imunes, na inflamação, na coagulação, na formação de tumores, em distúrbios do sistema nervoso e na virulência de microrganismos. Dessa forma, a busca de inibidores específicos para as NTPDases possui grande interesse científico, uma vez que nenhum inibidor potente e específico para uma isoforma ainda foi encontrado. Assim, o objetivo deste trabalho foi purificar a apirase de S. tuberosum, realizar a caracterização dessa proteína e sua aplicação como ferramenta biotecnológica no estudo das NTPDases através da triagem in vitro de substâncias e frações com potencial inibitório sobre sua atividade. No processo de purificação foi possível avaliar o sucesso da técnica através da identificação da apirase de batata por western blotting e espectrometria de massas. A atividade fosfohidrolítica da proteína foi preservada durante a purificação e verificada através de depósitos de fosfato de cálcio em altura simulares para os substratos ATP e ADP em gel não-desnaturante. Os testes de inibição da atividade in vitro revelaram 8 substâncias isoladas (A6, A7, A8, A45, A47, A33, Cu(isapn) e Aceturado de diminazeno) e 10 frações derivadas de extratos de diferentes espécies vegetais (A2, A50, A49, A19, A37, A41, A22, A42, A39 e A30) com potencial inibitório promissor sobre a atividade ATPásica da apirase de batata. As análises in silico através de docking molecular realizado com as substâncias isoladas revelou que todas elas possuem espontaneidade de ligação com o sítio catalítico da enzima, reiterando seu potencial de inibição. Estes resultados revelaram substâncias com potencial inibitório promissor sobre a enzima, sinalizando uma aplicação dessas substâncias no tratamento de diversas condições fisiopatológicas relacionadas com a exacerbação da sinalização purinérgica no organismo. |
