Produção das proteínas recombinantes Core, Ns3, Ns4b, Ns5a do vírus da Hepatite C e caracterização da resposta imune humoral

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Neves, Walter Luiz Lima
• Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/1581438555369469
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal do Amazonas; Instituto de Ciências Biológicas; Brasil; UFAM; Programa de Pós-graduação em Imunologia Básica e Aplicada
• Palavras-chave em Português: Hepatite por vírus; Resposta imune; Epidemiologia - Pesquisa; CIENCIAS BIOLOGICAS; Hepatite C; Proteínas; Purificação; Recombinante
• Link de acesso: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/8290

Introdução: As infecções hepáticas causadas por vírus estão entre as mais graves, com prevalência no mundo todo. Segundo dados da OMS, o Vírus da Hepatite C (HCV) acomete cerca de 170 milhões de pessoas em todo o mundo, o que corresponde a aproximadamente 3% da população mundial. Desse total, nota-se que a maioria dos indivíduos (80%) não desenvolve resposta virológica sustentada, evoluindo para infecção crônica. Objetivo: Produzir, expressar e purificar as proteínas recombinantes CORE, NS3, NS4b e NS5a do vírus da Hepatite C, otimizadas para E. coli e analisar a reatividade destas proteínas frente aos soros de pacientes com hepatite C crônica. Material e Métodos: Os genes recombinantes das proteínas CORE (594pb), NS3 (897pb), NS4b (804pb), NS5a F1 (678pb) e NS5a F2 (692pb) foram construídos e otimizados para expressão em E. coli BL21 (DE3) pLysS. Sítios de enzimas de restrição foram adicionados nas sequências para realizar a subclonagem em vetor pRSET, o qual inclui a sequência de aminoácidos da proteína da cauda 6XHIS. Soros de pacientes com hepatite C crônica obtidos em estudos prévios, foram usados para avaliar a reatividade contra as proteínas recombinantes produzidas. Resultados e conclusão: Logo, as proteínas recombinantes CORE, NS3, NS4b, NS5a F1 e NS5a F2 foram expressas com sucesso em hospedeiro E.coli. Estas foram purificadas em condições nativa e desnaturada utilizando coluna de níquel. As proteínas recombinantes CORE e NS5 F2 foram imunorreativas para um pool de soros de pacientes com hepatite C crônica, não sendo detectada reatividade com soros negativos. Não foi observado nenhuma reatividade para porção N-terminal da proteína NS5a. Estudos futuros buscaram analisar a reatividade individual de um grande número pacientes, para cada proteína recombinante.