Análise do uso de Bacillus subtilis como hospedeiro para expressão de VHH anti-fosfolipase de Bothrops jararacussu

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Souza, Caio Coutinho de
• Outros Autores: https://lattes.cnpq.br/5202386176640563
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal do Amazonas; Instituto de Ciências Biológicas; Brasil; UFAM; Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
• Palavras-chave em Português: Bothrops; Proteínas recombinantes; Bactérias; Cobras venenosas; BIOLOGIA MOLECULAR; Bacillus subtilis KO7; Vetor fagomídeo; VHH; Bothrops jararacussu; Fosfolipase
• Link de acesso: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/9229

Os Homodímeros Variáveis de Cadeia Pesada (VHHs), também chamados de nanocorpos de camelídeos, são fragmentos de anticorpos IgG incomuns e exclusivos de animais da família camelidae, que atingem alta afinidade e especificidade de ligação ao antígeno. Atualmente são agentes potenciais para aplicações no tratamento ou diagnóstico em casos de acidentes ofídicos. Diferentes hospedeiros já produziram nanocorpos recombinantes, porém ainda há desafios nesta produção que precisam ser superados.Visando contornar estes problemas, exploramos o uso de Bacillus subtilis para a expressão de VHHs. No capítulo I desta dissertação apresentamos um artigo de revisão que inicialmente levantou os principais estudos que justificam a escolha de B. subtilis na pesquisa e nas indústrias. Correlacionamos às características deste hospedeiro atreladas às variadas estratégias de engenharia genética para produzir biomoléculas de forma eficiente e econômica. O capítulo II aborda os resultados decorrentes da utilização de B. subtilis cepa KO7 como hospedeiro para produzir um VHH anti-fosfolipase. O B. subtils KO7 foi transformado com o plasmídeo pHEN1 e foi feita a posterior indução da expressão da proteína, a confirmação da expressão foi realizada pela técnica de western-blot e a funcionalidade da proteína foi avalida via ensaio de citometria de fluxo. Os resultados demonstraram que a transformação utilizando o vetor pHEN1 foi eficiente e as induções utilizando o indutor IPTG ou a lactose foram satisfatórias. A proteína VHH foi expressa na porção solúvel do lisado bacteriano apresentando uma massa molecular de aproximadamente 11 KDa. Observou-se um alto reconhecimento do VHH anti-fosfolipase contra as proteínas miotóxicas Bothropstoxina I (BthTX-I) e Bothropstoxina II (BthTX-II) de Bothrops jararacussu, constatando que B. subtilis KO7 é um potencial hospederio para produzir VHHs solúveis e com sua funcionalidade preservada para posterior uso clínico.