Investigação de tuberculose pulmonar por infecção policlonal de Mycobacterium tuberculosis e possível associação com a resistência aos fármacos antimicobacterianos

• Ano de defesa: 2012
• Autor(a) principal: Ogusku, Maurício Morishi
• Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/5288905856205986
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal do Amazonas - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia; Instituto de Ciências Biológicas; Brasil; UFAM - INPA; Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
• Palavras-chave em Português: Tuberculose pulmonar; Infecção policlonal; Farmacologia; Resistência aos fármacos; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
• Link de acesso: http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5369

Na prática clínica é amplamente admitido que um episódio de tuberculose (TB) ativa seja causado por um único clone de Mycobacterium tuberculosis. Contudo, vários estudos têm revelado que há uma heterogeneidade de clones e isso pode ser bem maior que o esperado. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi investigar a TB pulmonar por infecção policlonal de M. tuberculosis em pacientes recém-diagnosticados, a partir de uma amostra de escarro e antes do início do tratamento. Foram selecionadas 62 amostras de escarros, sendo 31 paucibacilares e 31 multibacilares. A triagem de clones em meio de 7H10 proporcionou o isolamento de clones sensíveis e resistentes à Isoniazida (INH) e/ou Rifampicina (RIF) coexistentes em 19 (30,6%) isolados de M. tuberculosis. A genotipagem por DRE-PCR e o sequenciamento parcial de DNA para os genes katG, inhA e rpoB foram realizados em 74 clones sensíveis à INH e RIF, 65 clones resistentes à INH, 1 clone resistente à RIF e 3 clones resistentes à INH e RIF. A presença de clones sensíveis e resistentes a INH e/ou RIF, assim como a ocorrência de diferentes genótipos indicam a heterogeneidade de clones em um mesmo isolado de M. tuberculosis. A frequência de infecção policlonal observada foi superior aos estudos descritos na literatura, visto que os mesmos apresentaram percentuais de 0,4% a 19,0%. Estes resultados permitem afirmar que a presença de infecção policlonal não é um fenômeno raro em pacientes com TB pulmonar na população estudada. O sequenciamento parcial dos genes katG revelou que apenas 4,4% dos clones resistentes à INH apresentaram as mutações comumente descritas neste gene. Para o gene inhA não foram detectadas mutações para os clones resistentes à INH. Os clones resistentes para RIF apresentaram mutações no gene rpoB. Dos clones resistentes à INH, 83,8% não apresentaram mutações nos genes katG e inhA, enquanto 11,7% apresentaram mutações ainda não descritas no gene katG. A ausência das mutações comumente associadas à resistência medicamentosa nos genes katG e inhA e a detecção de novas mutações em clones de M. tuberculosis resistentes à INH, explicitam a necessidade de sequenciar fragmentos maiores desses genes ou ampliar a busca de mutações em outros genes, a fim de que sejam propostas estratégias mais rápidas para a detecção de resistência em M. tuberculosis. Os resultados da presente pesquisa evidenciam que a infecção policlonal está presente em aproximadamente 1/3 dos pacientes de TB recém-diagnosticados, seja pelas características fenotípica ou genotípica dos clones de M. tuberculosis, embora estas não estejam estritamente relacionadas.