Atividade pró-coagulante da toxina ExoU de Pseudomonas aeruginosa: efeito sobre a expressão do fator tissular em células epiteliais respiratórias

• Ano de defesa: 2008
• Autor(a) principal: Feliciano, Luís Filipe Pereira
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade do Estado do Rio de Janeiro; Centro Biomédico::Faculdade de Ciências Médicas; BR; UERJ; Programa de Pós-Graduação em Microbiologia
• Palavras-chave em Português: Pseudomonas aeruginosa; ExoU; Tissue factor; Airway epithelial cells; Procoagulant activity; Fator tissular; Células epiteliais aéreas; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA
• Link de acesso: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/14417

Para avaliar a capacidade da toxina ExoU de P. aeruginosa de induzir a expressão do fator tissular (FT) por células epiteliais respiratórias da linhagem BEAS-2B, células infectadas pela cepa PA103, produtora da toxina, foram comparadas com outras infectadas por cepa mutante obtida por deleção do gene exoU e com células controles não infectadas quanto a i) expressão do mRNA do FT, por RT-PCR; ii) expressão da proteína FT em lisados celulares, por ensaio imunoenzimático (ELISA), e na superfície celular, por citometria de fluxo; iii) atividade pró-coagulante das células, pela determinação da capacidade de indução de coagulação de plasma humano normal e do lisado celular, através de ensaio colorimétrico; iv) presença de FT solúvel no sobrenadante das culturas, por ELISA; v) liberação de micropartículas expressando FT e fosfatidilserina (FS), por citometria de fluxo. Nossos resultados mostraram que ExoU foi responsável pelo aumento da expressão do mRNA e da concentração da glicoproteína FT tanto nos lisados quanto na superfície celular. Esse aumento foi revertido quando as bactérias foram tratadas com uma droga inibidora de PLA2 (MAFP), comprovando-se a dependência da atividade fosfolipásica A2 de ExoU para a modulação da expressão do FT. Células infectadas pela cepa PA103 induziram uma diminuição no tempo de coagulação do plasma humano normal e o aumento da hidrólise do substrato sintético utilizado no teste colorimétrico em comparação com as células infectadas com a cepa mutante, mostrando que o FT expresso era funcionalmente ativo. Foi também detectado um aumento na concentração de FT solúvel presente nos sobrenadantes de culturas infectadas por PA103 e no número de micropartículas expressando, simultaneamente, FT e FS em relação à cultura infectada pela cepa PA103∆exoU. Os resultados obtidos nos testes in vitro foram validados pela demonstração de que a concentração de FT no parênquima pulmonar de camundongos infectados, por via intratraqueal, com a cepa selvagem foi significativamente superior à detectada nos animais infectados com a cepa mutante.