Identificação genotípica e fenotípica de leveduras de importância clínica para autenticação em banco de dados de leveduras de Instituição Militar de Saúde

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Pinheiro, Eliane Olmo
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade do Estado do Rio de Janeiro; Centro Biomédico::Faculdade de Ciências Médicas; Brasil; UERJ; Programa de Pós-Graduação em Saúde, Medicina Laboratorial e Tecnologia Forense
• Palavras-chave em Português: Systemic candidiasis; Blood culture; Identification of yeasts; MALDI-TOF MS; Leveduras bank; Candidíase sistêmica; Hemocultura; Identificação de leveduras; PCR em tempo real; Banco de leveduras; CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA::MICROBIOLOGIA APLICADA::MICROBIOLOGIA MEDICA
• Link de acesso: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/17838

Candidíases invasiva continua sendo prevalente causa de morbidade e mortalidade em pacientes imunocomprometidos. Essa forma de candidíase é um dos aspectos mais polimórficos das micoses sistêmicas e, em muitos casos, é um achado terminal. Nas últimas décadas, as tecnologias para identificação de leveduras têm avançado significativamente, com métodos bioquímicos automatizados, ensaios baseados em análise de ácidos nucleicos e proteômicos. Particularmente a proteômica na sua versão Espectrometria de Massas por Tempo de Voo (MALDI-TOF MS), tem se apresentado como uma alternativa promissora para a identificação na rotina de espécies de leveduras. O presente trabalho, teve como objetivo a recuperação de leveduras isoladas de amostras clínicas, a partir de frascos de hemocultura, provenientes do serviço de microbiologia de um hospital privado no Rio de Janeiro, e re-identificação das mesmas, através de métodos fenotípicos, utilizando meio cromogênico e o equipamento vitek 2, assim como o teste de formação de tubo germinativo e produção de clamidósporos para C. albicans e C. dubliniensis. MALDI-TOF MS e PCR em tempo real também foram utilizados para autenticação das cepas e criação de um banco de leveduras, para fins de pesquisa científica e atividade de ensino. Foi selecionado o método de Castellani, para a manutenção e conservação dos microrganismos na Coleção de Candidíases invasiva continua sendo prevalente causa de morbidade e mortalidade em pacientes imunocomprometidos. Essa forma de candidíase é um dos aspectos mais polimórficos das micoses sistêmicas e, em muitos casos, é um achado terminal. Nas últimas décadas, as tecnologias para identificação de leveduras têm avançado significativamente, com métodos bioquímicos automatizados, ensaios baseados em análise de ácidos nucleicos e proteômicos. Particularmente a proteômica na sua versão Espectrometria de Massas por Tempo de Voo (MALDI-TOF MS), tem se apresentado como uma alternativa promissora para a identificação na rotina de espécies de leveduras. O presente trabalho, teve como objetivo a recuperação de leveduras isoladas de amostras clínicas, a partir de frascos de hemocultura, provenientes do serviço de microbiologia de um hospital privado no Rio de Janeiro, e re-identificação das mesmas, através de métodos fenotípicos, utilizando meio cromogênico e o equipamento vitek 2, assim como o teste de formação de tubo germinativo e produção de clamidósporos para C. albicans e C. dubliniensis. MALDI-TOF MS e PCR em tempo real também foram utilizados para autenticação das cepas e criação de um banco de leveduras, para fins de pesquisa científica e atividade de ensino. Foi selecionado o método de Castellani, para a manutenção e conservação dos microrganismos na Coleção de Leveduras. Nesse estudo, foram analisados 112 isolados de leveduras, sendo observado, dentre as espécies, as seguintes taxas de recuperação: C. tropicalis (27,7%), complexo C. albicans (21,6%), complexo C. parapsilosis (20,7%), complexo C. glabrata (16,2%), C. krusei (3,6%), C. haemuloni (1,8%). Dentre as espécies com o menor percentual de isolamento, foram encontradas: C. dubliniensis, C. famata, complexo C. guilliermondii, C. pelicullosa, C. utilis (0,9%) e outras espécies de leveduras (4,5%). Foi possível verificar o bom desempenho do MALDI-TOF MS frente aos métodos fenotípicos para a caracterização das leveduras assim como sua boa correlação com o PCR em tempo real. Através dessa pesquisa, foram elaborados os protocolos técnicos, formulários e bem como Compêndio de Métodos e de Boas Práticas em Coleção de Cultura de Leveduras. O presente estudo permitiu a recuperação de cepas de leveduras de interesse clínico para autenticação, através das metodologias fenotípicas e genotípicas e criação de um banco de microrganismos para atender à demanda de pesquisa do Instituto de Biologia do Exército.