Avaliação da expressão de citocinas pró e anti-inflamatórias após estímulo celular com diferentes agentes irrigantes

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Tomaz, Milena do Valle
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade do Estado do Rio de Janeiro; Centro Biomédico::Faculdade de Odontologia; BR; UERJ; Programa de Pós-Graduação em Odontologia
• Palavras-chave em Português: Chitosan; Chlorhexidine; Cytokines; Etidronic Acid; Grape Seed Extract; Root Canal Irrigants; Sodium Hypochlorite; Ácido etidrônico; Citocinas; Clorexidina; Extrato de semente de uva; Hipoclorito de sódio; Irrigantes do canal radicular; Quitosana; CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::ODONTOLOGIA
• Link de acesso: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/14083

O objetivo do trabalho foi investigar o efeito de diferentes soluções químicas auxiliares, em concentrações subcitotóxicas, na expressão de citocinas pró e anti-inflamatórias, quando em contato com células da linhagem de linfoma humano, diferenciadas em macrófagos, human macrophage-like (U937), através da adição de 125ng/mL de PMA. As concentrações, citotóxica e subcitotóxica, de cada solução, foram determinadas de acordo com padrão ISO, utilizando-se fibroblastos de camundongos (L929). As células L929 foram cultivadas em meio MEM completo e mantidas em placas de 96 poços. As células foram então colocadas em contato com as diluições das soluções químicas auxiliares (a partir das concentrações recomendadas para uso, NaOCL 5,25%; CHX 2%; Quitosana 0,2%; HEBP 18%; GSE de Vitis vinífera, 6,5%), por 24 horas a 37ºC em estufa de CO2. Em seguida, o meio de cultivo contendo 1mg/mL de MTT foi adicionado aos poços em triplicata, para avaliação da viabilidade celular e determinação das concentrações citotóxicas (30% de morte das células L929) e subcitotóxicas (15% de morte) por regressão linear por meio do programa GraphPad Prism versão 6.0. As concentrações subcitotóxicas foram colocadas em contato com as células human macrophage-like (U937) por 60 min. Os sobrenadantes da pré-incubação (controles sem substâncias químicas auxiliares), e incubação com as soluções químicas auxiliares em meio DMEM completo foram congelados em freezer ultrafrio ( 80ºC) e avaliados para as concentrações de dezessete citocinas através do kit Bio-Plex Pro Human Th17 Cytokine Panel® pelo método Luminex®. Foi possível obter valores de expressão de 7 citocinas pró-inflamatórias: IL-1β, TNFα, IL-6, IL-17A, IL-17F, IL-22 e IL-23. As substâncias com maior atividade citotóxica (padrão ISO para morte celular) foram em ordem de grandeza, a quitosana, a CHX, o NaOCl, o HEBP e o GSE de Vitis vinifera. As concentrações subcitotóxicas das soluções químicas auxiliares, CHX e NaOCl, induziram ao aumento da maioria das citocinas pró-inflamatórias, exceto para a IL-6. Quanto a IL-1β, a quitosana e a CHX, estas foram as que mais induziram a expressão pelas células U937 (P<0,05),enquanto o NaOCl induziu maior expressão de TNFα (P>0,05). Dentre as citocinas relacionadas ao fenótipo Th17, a CHX foi a que mais induziu a expressão de IL-17A (P<0,05), IL-17F e IL-23, seguido do NaOCl(P<0,05). O NaOCl induziu maior expressão de IL22 seguido da CHX (p<0,05). Quanto a IL-6, todas as substâncias modularam a sua expressão pelas células U937(p>0.05). O HEBP atuou como um excelente modulador da expressão de citocinas pró-inflamatórias, induzindo a redução da expressão de todas as citocinas testadas (P<0,05). O GSE de Vitis vinifera, apesar de ser o menos citotóxico não apresentou diferença estatística para o controle em nenhuma das situações avaliadas, exceto para a redução da IL-6 (assim como o HEBP e a quitosana) (p<0,05). A quitosana comportou-se de forma similar ao GSE de Vitis vinífera (p>0,05) exceto para a IL-1β. Conforme observado, as substâncias químicas auxiliares são capazes de induzir a expressão de citocinas pró-inflamatórias diversas. O HEBP foi o agente químico que melhor modulou a expressão de citocinas pró-inflamatórias.