Glutationa S-transferase do cérebro de pacu, Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887) em diferentes tensões de oxigênio

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Leitão, Santiago Alonso Tobar
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade do Estado do Rio de Janeiro; Centro Biomédico::Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes; BR; UERJ; Programa de Pós-Graduação em Biociências
• Palavras-chave em Português: Pantanal; Oxidative stress; Glutathione S-transferase; Estresse oxidante; Glutationa S-transferase; Pacu (Peixe); Pantanal Mato-grossense (MS e MT); Glutationa S-Transferase pi; Estresse oxidativo; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::ENZIMOLOGIA
• Link de acesso: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/16184

No pantanal ocorre o pulso de inundação, fenômeno que provoca esgotamento sazonal e diário do oxigênio na água de rios e bacias. Variação do oxigênio dissolvido faz mudar a disponibilidade de oxigênio para as mitocôndrias, o que resulta em redução parcial do oxigênio nas células. Se moléculas de oxigênio não são inteiramente reduzidas até H2O, íons de oxigênio conhecidos como espécies reativas de oxigênio (ERO) podem escapar da cadeia respiratória. ERO são potentes oxidantes, o que os torna danosos para a vida em concentrações elevadas. Desde que o pacu, Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887), é uma espécie de peixe que suportou grandes variações da concentração de oxigênio por toda a sua evolução no Pantanal, nós decidimos pesquisar para saber se existem atividades enzimáticas antioxidantes capazes de neutralizar as ERO em seus órgãos. Material e Métodos: Neste trabalho purificamos GST do cérebro de pacus em normoxia e hipóxia por cromatografia de afinidade à partícula MagneGSTTM. A fração purificada foi separada por eletroforese em gel de poliacrilamida e em seguida os ensaios cinéticos foram realizados com os substratos eletrofílico CDNB e 4-HNE. Para caracterizar a proteínas presentes na fração purificada foi realizada uma eletroforese bidimensional cujos spots foram recortados e analisados em espectrômetro de massa (MALDI ToF-ToF). Resultados: A separação por SDS-PAGE da fração purificada mostrou duas bandas de proteínas nos cérebros de pacus em normoxia e três nos pacus em hipóxia. Essas proteínas retêm aproximadamente 60% da atividade total de GST medida na fração citosólica em ambos os grupos. O ensaio cinético da fração purificada mostrou pequenas variações nos valores de Vmax e KM, resultado que sugere a presença de diferentes isoenzimas de GST. Além do mais, as variações não apresentaram o mesmo perfil entre as frações purificadas dos grupos normoxia e hipóxia, portanto é possível que o conjunto de isoenzimas presentes seja diferente em cada condição. Os resultados da eletroforese com focalização isoelétrica do grupo normoxia apresentou 14 spots com pontos isoelétricos entre 5,9 - 9,0. Já o grupo hipóxia mostrou 8 spots com pontos isoelétricos entre 6,5 -9,47. Apenas um spot de proteína do grupo hipóxia não é comum ao grupo normoxia. A análise da sequência primária mostrou uma sequência de 11 aminoácidos com 100% de similaridade com a GSTP1 do Salmo Salar. Conclusões: O conjunto de dados obtidos sugere que a atividade de GST encontrada possa contribuir para a sobrevivência do Pacu às variações de oxigênio que ocorrem no Pantanal. É possível que a GSTP1 tenha papel crucial nessa resistência.