Transformação genética de Candida spp via Agrobacterium tumefaciens

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Oliveira, Marcelo Tempesta
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Candida; Genética microbiana; Transformação bacteriana; Agrobacterium; Microbial genetics; Bacterial transformation
• Link de acesso: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/10981

Resumo: Este trabalho descreve o estabelecimento de um sistema de transformação eficiente para as espécies de leveduras oportunistas Candida albicans, C tropicalis e C glabrata, importantes patógenos humanos, pelo emprego da metodologia de transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens As células fúngicas foram transformadas em diferentes condições de co-cultivo utilizando o vetor binário pBTS-4, que contém o gene de resistência ao antibiótico Higromicina B (hph) como marcador de seleção Nossos resultados indicam uma freqüência de transformação para C albicans, C tropicalis e C glabrata de até 1471, 1612 e 83 transformantes obtidos por co-cultivo, respectivamente Após quatro repiques em meio não seletivo, todos os transformantes analisados cresceram quando expostos novamente ao meio de seleção, sendo desta forma 1% estáveis mitóticamente A PCR e o dot-blot confirmaram molecularmente a transformação das espécies de Candida, gerando o produto de amplificação esperado de 6pb, e hibridado positivamente com os transformantes quando o mesmo foi utilizado como sonda A habilidade da linhagem AGL-1 em aderir às células fúngicas nas condições de co-cultivo foi observada através do emprego de microscopia eletrônica de varredura e transmissão A reprodutibilidade do sistema de transformação descrito neste trabalho pode fornecer um método para a manipulação genética destes patógenos que irá facilitar a análise molecular detalhada destas espécies fúngicas