Cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos utilizando angiotensina II (ANG II), fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e peptídeo intestinal vasoativo (VIP)

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2010
Autor(a) principal: Bruno, Jamily Bezerra
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=66910
Resumo: Os objetivos do presente estudo foram avaliar o efeito de diferentes concentrações da angiotensina II (ANG II), fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e peptídeo intestinal vasoativo (VIP) no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos e verificar a localização do receptor 2 do VEGF (VEGFR-2) e a expressão dos receptores da ANG II (AGTR1 e AGTR2) em ovários caprinos. Para investigar a localização do VEGFR-2 e expressão do AGTR1 e AGTR2 no ovário caprino, foram empregadas as técnicas de imunohistoquímica e PCR em tempo real, respectivamente. Para avaliar a eficiência das substâncias supracitadas sobre a sobrevivência e o crescimento folicular, fragmentos de córtex ovariano foram cultivados in vitro por um ou sete dias em meio essencial mínimo suplementado (MEM+ ) adicionado de diferentes concentrações das referidas substâncias. Antes e após o período de cultivo, os fragmentos de córtex ovariano foram fixados e processados para histologia clássica. Os folículos foram classificados quanto ao grau de desenvolvimento em primordiais ou em desenvolvimento, e quanto à sobrevivência em normais ou degenerados. O diâmetro folicular foi avaliado antes e após o cultivo. As técnicas de microscopia de fluorescência e microscopia eletrônica de transmissão (MET) foram utilizadas para melhor avaliar a viabilidade e morfologia desses folículos, respectivamente. Após definição das melhores concentrações de VIP, foi realizado um último experimento a fim de quantificar a expressão dos RNAm para o VIP em ovários caprinos através da técnica de PCR em tempo real, e avaliar a influência do VIP isoladamente ou em associação ao FSH sobre a sobrevivência e o desenvolvimento de folículos secundários caprinos isolados, bem como sobre a expressão do RNAm para o VIP e receptor de FSH (FSH-R) nesses folículos cultivados por seis dias. Os resultados do cultivo in vitro mostraram que após sete dias, 10 ng/mL de ANG II promoveu a manutenção da viabilidade e ultraestrutura de folículos préantrais caprinos. Os RNAm para AGTR1 e AGTR2 foram detectados em todas categorias e tipos foliculares estudados. No que se refere ao VEGF, as concentrações de 10 e 200 ng/mL foram mais eficientes para promover o crescimento e manter a viabilidade, respectivamente. Além disso, o receptor VEGFR-2 foi encontrado em oócitos de folículos em todos os estágios de desenvolvimento e em células da granulosa de folículos em crescimento. O VIP foi mais efetivo em promover o crescimento e manutenção da ultraestrutura folicular após sete dias de 11 cultivo quando utilizado na concentração de 10 ng/mL. A presença de RNAm para o VIP foi demonstrada em todas categorias foliculares em ovários de cabras, mostrando um aumento em seus níveis durante a transição de folículo primordial para secundário. No entanto, a utilização de VIP e/ou FSH não afetou o desenvolvimento de folículos secundários e não alterou os níveis de RNAm para FSH-R embora tenha reduzido os níveis de RNAm para o VIP após cultivo in vitro de folículos pré-antrais por seis dias. Diante disso, concluiu-se que ANG, VEGF e VIP apresentam importantes funções no desenvolvimento in vitro de folículos préantrais caprinos. Palavras-chave: ANG II. VIP. VEGF. Pré-antral. Cultivo in vitro.