NESTED PCR-DUPLEX E ANÁLISE FILOGENÉTICA DE ISOLADOS DE LENTIVÍRUS DE PEQUENOS RUMINANTES

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: MENEZES, REBECA CAVALCANTE MARINHO DE
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
• Palavras-chave em Português: Ciências veterinárias
• Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=83846

<div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">RESUMO</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">As ferramentas moleculares são de grande importância para a realização do diagnóstico precoce das lentiviroses de pequenos ruminantes, bem como para permitir uma caracterização das cepas circulantes nos rebanhos. A caracterização molecular dos lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR) pode auxiliar no estudo das potenciais diferenças na virulência entre as linhagens circulantes, compreender suas relações genéticas, patogênese, epidemiologia e sua inclusão nos grupos estabelecidos, bem como pode ser relevante para o desenvolvimento de testes de diagnósticos mais sensíveis. Dessa forma, o objetivo deste projeto foi padronizar uma técnica de Nested PCR-duplex que permitisse a detecção simultânea de LVPR e ainda realizar a caracterização molecular desses vírus a partir do sequenciamento parcial das regiões gag e LTR de lentivírus de pequenos ruminantes isolados de caprinos e ovinos. Para tanto foram coletadas amostras de sangue de ovinos e caprinos, para realização de um levantamento sorológico, através de IDGA e Nested PCR convencional. Para realização da PCR-Duplex, foram confeccionados os pares de primers para cada região (gag, pol e LTR), sendo estes ancorados em regiões mais conservadas dentro destes genes. A PCR-duplex foi realizada e padronizada utilizando amostras padrões positivas (CAEV Cork e MVV K1514), visando avaliar a capacidade de detecção da técnica desenvolvida. Finalmente, foram realizadas Nested-PCR e PCR-Duplex de amostras de campo a fim de determinar a capacidade de detecção da técnica desenvolvida. As amostras virais isoladas foram sequenciadas e as regiões gag e LTR analisadas. Os resultados obtidos demonstraram que os primers para a região LTR são mais específicos para detecção de Lentivírus ovino, enquanto os primers para as regiões gag e pol são mais específicos para detecção dos Lentívirus de caprinos. Além disso, a PCR-Duplex desenvolvida permitiu a detecção simultânea dos Lentivírus ovinos e caprinos em um único ensaio, sendo uma ferramenta de diagnóstico valiosa para detecção de LVPR. O sequenciamento genético das amostras de campo demonstrou que não houve nenhum caso de infecção cruzada, uma vez que as amostras de ovinos pertecem ao grupo filogenético do MVV K1514 e as cepas de caprinos estão melhor relacionadas com o grupo do CAEV Cork. A última etapa da experimentação envolveu um estudo clínico, patológico e molecular de isolados do vírus Maedi Visna (MVV) detectado em ovinos da região nordeste do estado do Pará. Para realização desse estudo, foram realizados exames clínicos, testes sorológicos através da técnica de IDGA, isolamento viral a partir de co-cultivo de leucócitos em células de membrana sinovial ovina (MSO) e Nested-PCR para confirmação do diagnóstico pelo método molecular. As amostras virais isoladas foram sequenciadas e comparadas com sequencias conhecidas previamente depositadas no banco de dados. Um animal veio a óbito durante a experimentação, o que possibilitou a realização de necropsia e exames histopatológicos para pesquisa de lesões relacionadas com a infecção por MVV. Após a realização dos testes verificou-se a ocorrência do MVV na região estudada, causando quadro de lesões nos animais acometidos. Após o sequenciamento genético verificou-se que as cepas isoladas são relacionadas com o grupo do MVV K1514 e ainda que a região gag é uma região bem mais conservada do que a região LTR.</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Palavras-chave: PCR-Duplex, diagnóstico, molecular, LVPR, sequenciamento.</span></font></div>