Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2014 |
| Autor(a) principal: |
Brito, Ivina Rocha |
| Orientador(a): |
Não Informado pela instituição |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Tese
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| Tipo de acesso: |
Acesso embargado |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Estadual do Ceará
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Palavras-chave em Português: |
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| Link de acesso: |
https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=106786
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Resumo: |
<font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Este trabalho avaliou 1) os níveis de RNAm e localização da proteína para os membros da família do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF) em ovários de cabras, utilizando qPCR e imunohistoquímica, respectivamente; 2) a concentração ideal de alginato (ALG) para o cultivo de folículos pré-antrais caprinos isolados; 3) os efeitos da quantidade de folículos (1 ou 5), da forma de cultivo em grupo (em gotas individuais ou na mesma gota) e do tipo de hidrogel (ALG, fibrina-alginato [FA] e hialuronato [HA]) sobre o desenvolvimento folicular in vitro. Para tanto, folículos secundários caprinos isolados foram inclusos ou não (controle) em ALG (0,25%, 0,5% ou 1%) e cultivados por 18 dias. Após o cultivo folicular, os oócitos foram destinados à maturação in vitro (MIV). Os níveis de estradiol e progesterona foram mensurados, bem como a expressão de RNAm para CYP19A1 e 3βHSD foi quantificada. Ainda, folículos foram cultivados individualmente ou em grupo, em gotas separadas ou na mesma gota de ALG, por 18 dias. Posteriormente, os folículos foram inclusos ou não (controle) em ALG, FA ou HA e cultivados por 18 dias. Estradiol e progesterona foram mensurados e os níveis de RNAm para CYP19A1, 3βHSD, Cx43, Cx37, MMP-9 e TIMP-2 foram avaliados. Finalmente, grupos de 5 folículos foram inclusos em FA e cultivados por 30 dias. Os oócitos maturos foram ativados partenogeneticamente. De acordo com os resultados do estudo in vivo (Fase 1), foram observados níveis significativamente superiores de RNAm para PDGF-B em folículos primários e PDGF-D em folículos secundários. Em folículos antrais, complexos cumulus-oócito (CCO) de folículos pequenos apresentaram níveis superiores de RNAm para PDGF-A em relação às suas células da granulosa/teca (GT) e aos CCO de folículos grandes (P<0,05). Níveis de RNAm para PDGF-B, -D e PDGFR-α, -β foram significativamente superiores em GT de folículos grandes em comparação aos seus CCO e às GT de folículos pequenos. Todas as proteínas foram observadas no citoplasma dos oócitos. Em células da granulosa, todos os PDGF e PDGFR-β foram detectados de folículos secundários em diante. Nas células da teca, todas as proteínas, exceto PDGF-C, estavam presente em folículos antrais. No tocante ao cultivo in vitro (Fase 2), ALG 0,25% melhorou a formação de antro, crescimento, produção hormonal, expressão gênica para CYP19A1 e 3βHSD e retomada da meiose em relação às demais concentrações de ALG (P<0,05). A inclusão dos folículos na mesma gota de ALG melhora significativamente o diâmetro folicular em comparação ao cultivo individual, e a formação de antro e retomada da meiose em relação ao cultivo em grupo em gotas de ALG separadas. Folículos cultivados em FA cresceram progressivamente até o dia 18 e geraram oócitos maturos. A secreção hormonal foi superior em folículos inclusos em hidrogéis (P<0,05). Níveis de RNAm para todos os genes avaliados, exceto CYP19A1, foram similares entre o grupo FA e folículos antrais não cultivados. Embriões de 8 células foram obtidos após partenogênese de oócitos oriundos de folículos cultivados em FA por 30 dias. Concluindo, PDGF e seus receptores são diferencialmente expressos in vivo nas células foliculares de cabras de acordo com o estágio de desenvolvimento dos folículos. Ainda, a utilização de ALG 0,25% melhorou o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos. A inclusão de 5 folículos na mesma gota de FA melhorou a maturação oocitária e, após partenogênese, resultou na produção de embriões no estádio de 8 células.</span></font><div><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Palavras-chave: PDGF. Hidrogéis. Caprinos. Cultivo in vitro. Folículos pré-antrais.</span></font></div> |
