Estudo de proteases extracelulares de Aeromonas spp

• Ano de defesa: 2009
• Autor(a) principal: Zacaria, Jucimar
• Orientador(a): Echeverrigaray, Sérgio
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: MICROBIOLOGIA; Aeromonas; Proteases extracelulares; Zimogramas; Especificiadde das proteases; Elastase; Bactérias; Microbiologia; Biotecnologia
• Link de acesso: https://repositorio.ucs.br/handle/11338/443

Aeromonas são bactérias Gram-negativas aquáticas. Algumas espécies deste gênero são patógenos oportunistas de muitos animais aquáticos e terrestres, inclusive o homem. Vários fatores de virulência, tais como enterotoxinas, hemolisinas e outras enzimas, tem sido associados com a sua patogenicidade. As proteases extracelulares devem ser vistas como importantes enzimas envolvidas na versatilidade metabólica que possibilitam as Aeromonas persistir nos ambientes aquáticos, interagir com outros organismos, e causar doenças. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar: as diferenças nas atividades de proteases extracelulares e o perfil eletroforético entre espécies e isolados de Aeromonas, a especificidade por substratos de poteases de Aeromonas, e a clonagem e expressão heteróloga da elastase de Aeromonas. Os resultados mostraram que A. hydrophila apresenta maior atividade proteolítica, sem, entretanto exibir diferenças significativas entre isolados clínicos e ambientais. Zimogramas proteolíticos dos isolados de Aeromonas demonstraram diferentes perfis com 0 a 5 bandas, correspondendo a metalo, serino ou outras proteases. Duas proteases (56K Da e 22 KDa) apresentaram atividade sobre um grande espectro de substratos. A atividade caseinolítica de A. hydrophila IBAer 109 mostra um típico comportamento de "quorum sensing", sendo induzida por gelatina e reprimida por glicose, citrato e amônio. O gene da elastatse (ahyB) de A. hydrophila ATCC7966 foi clonado e expresso em E. coli sob controle do promotor lac. O transformante apresentou bandas proteolíticas de 63 e 38 KDa no espaço periplasmático e extracelular, indicando maturação parcial e dificuldade de secreção desta enzima.