Efeito do glucagon sobre a resposta inflamatória e remodelamento das vias aéreas em modelos murinos de inflamação pulmonar

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Insuela, Daniella Bianchi Reis
• Orientador(a): Carvalho, Vinícius de Frias
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/25637

Introdução: Glucagon é um hormônio hiperglicêmico cuja expressão do receptor (GcgR) foi detectada em pulmões, porém pouco se sabe sobre os efeitos desse hormônio nesse órgão. Neste trabalho, investigamos o efeito do glucagon sobre a contração do músculo liso e inflamação das vias aéreas em modelos murino de LPA/SDRA e asma. Metodologia: O efeito do glucagon (0,1 ou 1 \03BCM) sobre a contração de traqueias induzida pelo carbacol foi medido num sistema de órgão isolado. Algumas traqueias receberam antagonista do receptor do glucagon (des-His1-[Glu9]-glucagon-amida; 1 \03BCM) ou inibidores de adenilato ciclase (AC) (SQ 22,536; 5 \03BCM), NOS (L-NAME; 100 \03BCM), COX-1 (SC-560; 1\03BCM) ou COX-2 (NS-398; 0,03\03BCM), ou tiveram seu epitélio removido antes da exposição ao glucagon in vitro. O efeito do glucagon (0,1 \2013 10 \03BCg/Kg, i.n.) sobre a broncoconstrição provocada pela metacolina em camundongos foi testado utilizando pletismografia invasiva. Em alguns experimentos, foram administrados L-NAME (20 mg/Kg) ou SC-560 (5 mg/Kg) i.p. antes do glucagon. A expressão de CREB, fCREB, NOS-3, fNOS-3, COX-1 e TCR\03B1\03B2 foi avaliada por Western blot e a do GcgR foi analisada por citometria de fluxo. PGE2 foi quantificada por EIA. A ação do glucagon (1-10 \03BCg/Kg, i.n.) sobre a hiper-reatividade e inflamação das vias aéreas induzidas pelo LPS ou ovoalbumina, ambos 25 \03BCg/25 \03BCL i.n., foi testada por pletismografia invasiva, lavado broncoalveolar (BAL) e quantificação de citocinas por ELISA. No modelo da ovoalbumina análises histológicas avaliaram o infiltrado leucocitário e a deposição de matriz extracelular nos pulmões e a citometria de fluxo quantificou linfócitos TCD4+ e TCD8+ no BAL e linfonodos mediastinais O efeito do glucagon (0,03 \2013 3 \03BCM) sobre a quimiotaxia de polimorfonucleares humanos induzida por IL-8 in vitro foi investigado num espectrofotômetro. A ação do glucagon (0,03 - 30 \03BCM) sobre a proliferação e ativação de linfócitos T in vitro foi avaliada por citometria de fluxo. Resultados: Glucagon impediu a contração traqueal induzida pelo carbacol in vitro. Esse efeito do glucagon foi abolido pela remoção epitelial e pelo bloqueio do GcgR, AC, NOS ou COX- 1. Glucagon impediu a broncoconstrição provocada pela metacolina, num mecanismo sensível ao LNAME e SC-560. Glucagon aumentou a fosforilação de CREB e NOS-3 e os níveis de PGE2 nos pulmões, sem alterar a expressão de COX-1. Glucagon impediu a hiper-reatividade e a inflamação das vias aéreas induzidas pelo LPS ou ovoalbumina. Glucagon preveniu o aumento na expressão do TCR\03B1\03B2, no número de eosinófilos, na deposição de matriz extracelular nos pulmões e no número de TCD4+ e TCD8+ promovida pela ovoalbumina. As células polimorfonucleares expressaram o GcgR e o glucagon impediu a quimiotaxia dessas células in vitro. Glucagon reduziu a ativação e proliferação de células T estimuladas com anti-CD3 ou ovoalbumina in vitro. Conclusão: Esses resultados mostram uma atividade anti-espasmódica do glucagon nas vias aéreas que é mediada pelo aumento na ativação de NOS-3 e COX-1 com consequente liberação de NO e PGE2 pelo epitélio. Além disso, mostram um efeito antiinflamatório do glucagon em modelos de LPA/SDRA e asma, que possivelmente está relacionado com a modulação de neutrófilos e linfócitos T, respectivamente