Novas abordagens sobre o potencial antitumoral de produtos naturais e semi-sintéticos em melanoma in vitro

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Fontes, Sheila Suarez
• Orientador(a): Santos, Marcos André Vannier dos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Instituto Gonçalo Moniz
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/25057

INTRODUÇÃO: O câncer constitui importante causa de morbidade e mortalidade em todo o mundo e seus números continuam a aumentar demonstrando o impacto dessa doença para saúde pública. Em relação ao melanoma, apesar de sua baixa incidência em relação as demais neoplasias de pele, sua taxa de mortalidade é elevada, considerando seu risco aumentado para o desenvolvimento de metástases. Tem-se observado significativo progresso no desenvolvimento de novas terapias para o câncer. Entretanto, problemas relacionados à toxicidade para células normais e o desenvolvimento de resistência permanecem como limitação ao sucesso dos tratamentos. Assim as terapias em combinação apresentam papel promissor devido às inúmeras vantagens como o aumento da eficácia por efeitos sinérgicos e a superação da resistência aos medicamentos em comparação com a monoterapia. OBJETIVO: Avaliar os efeitos da combinação de CQ:DETC e β-Lap:DETC sobre células de melanoma murino, linhagem B16F10. METODOLOGIA: Células B16F10 e células Vero foram utilizadas para ensaios de inibição, com diferentes concentrações dos fármacos isolados e combinados. As avaliações de sinergismo e seletividade foram realizadas através de cálculo da FIC e da razão entre a IC50 dos fármacos na linhagem Vero e B16F10. Para as análises em MET e MEV as células foram tratadas por 24h com a IC50 dos fármacos isolados e combinados. Para avaliação de morte celular e estresse oxidativo, utilizamos as sondas Anexina V, PI e DHE, respectivamente. Para avaliação da toxicidade sistêmica, tratamos camundongos C57BL/6 com os fármacos isolados e combinados e avaliamos marcadores hepáticos, renais e histopatologia. RESULTADOS: A ação da combinação de CQ:DETC sobre células B16F10 na proporção 1:2 resultou em ação citotóxica, com IC50 de 13,40μM:26,81μM, respectivamente e para a combinação β-Lap:DETC na proporção 1:20 apresentou IC50 0,32μM:6,4μM, respectivamente. A ação combinada, avaliada em isobolograma, demonstrou perfil sinérgico para os efeitos de 75% de inibição para a combinação CQ:DETC e 50% e 75% de inibição para a combinação β- Lap:DETC. Esta combinação, seguindo a mesma proporção, gerou CC50 para a combinação CQ:DETC de 58,49μM:40,94μM, respectivamente, enquanto para a combinação β-Lap:DETC foi 0,356μM:6,71μM, respectivamente em células VERO, resultando em seletividade in vitro. As combinações promoveram acúmulo de espécies reativas de oxigênio sobre a forma de radicais superóxido, observados por DHE e isso resultou em morte celular por via apoptótica, preferencialmente. Esse achado foi corroborado por alterações morfológicas das células observados por microscopia eletrônica de varredura, bem como por alterações ultraestruturais verificadas por microscopia eletrônica de transmissão. A segurança dos tratamentos isolados e em combinação foi avaliada em camundongos C57BL/6, que resultou em discreta alteração nas concentrações AST e ALT para os tratamentos isolados, o que não se observou nos tratamentos em combinação. Não houve alteração nos níveis de ureia em nenhum dos tratamentos. Os tratamentos também não promoveram lesões no tecido cerebral ou cardíaco, mas foram observados danos hepáticos quando ministrados em monoterapia mas não nas combinações; e renais em ambos tratamentos. CONCLUSÃO: As substâncias testadas demonstraram ação citotóxica em melanoma murino in vitro, com baixa toxicidade sistêmica in vivo, o que sugere que, quando utilizados em combinação são candidatos promissores à se tornar um novo método terapêutico para o tratamento do melanoma. Contudo, mais experimentos são necessários para elucidar outros mecanismos de ação.