Análise das bases da especificidade de interação dos fatores de iniciação da tradução EIF4G e EIF4E de Leishmania major.

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Duarte, Mayara Sabino Leite de Oliveira.
• Orientador(a): Reis, Christian Robson de Souza
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/58512

A família Tripanosomatidae é composta de protozoários flagelados, e alguns deles compõem um grave problema de saúde pública mundial, como as leishmanioses. Os tripanosomatídeos possuem algumas peculiaridades, como o controle da expressão gênica por mecanismos pós-transcricionais, como a tradução. A iniciação da tradução começa com a formação do complexo EIF4F, que tem como função permitir o reconhecimento entre a subunidade menor ribossomal e o mRNA. O complexo EIF4F é constituído pelas subunidades EIF4E, EIF4A, e EIF4G. Em tripanosomatídeos, foram descritos dois complexos do tipo EIF4F:1- EIF4E3/EIF4G4/EIF4A1 e 2- EIF4E4/EIF4G3/EIF4A1. As interações entre EIF4E/EIF4G destes dois complexos foram previamente estudadas, sendo definidos que a região N-terminal das proteínas EIF4G3 e EIF4G4 possuem os motivos chaves de interação com as proteínas EIF4E4 e EIF4E3 respectivamente. entretanto, ainda não se conhecem as bases da especificidade destas interações. Diante do exposto, a proposta deste trabalho foi aprofundar o estudo das interações do complexo EIF4F e identificar que aminoácidos da região N-terminal dos homólogos EIF4G poderiam ser determinantes para a ligação especifíca aos parceiros EIF4E. Inicialmente, foi realizado um alinhamento dos aminoácidos da região N-terminal das proteínas EIF4G3 e EIF4G4 de Leishmania major para escolha das mutações a serem realizadas. Em seguida foram realizadas mutagêneses sítio dirigida nos genes codificantes EIF4G3 e EIF4G4 selvagens. Os genes mutantes foram expressos em fusão com a proteína GST e purificadas por cromatografia de afinidade. Para obtenção das proteínas fusionadas a histidinas, os genes EIF4E3 e EIF4E4, foram linearizados, transcritos e traduzidos para a realização em ensaios de pull down com as proteínas fusionadas a GST. Dados preliminares deste trabalho indicaram que apenas o LmEIFG4 MUT 2 (W32Y/T33L/A34E/I35P), demonstrou um desligamento da interação com parceiro LmEIF4E3 em ensaios de pull down. Os mutantes do EIF4G3 foram analisados também quanto a sua capacidade de ligação aos parceiros EIF4E4 em análises de bioinformática.Os ensaios de predição tridimensional e de dinâmica molecular dos complexos selvagens e mutantes revelaram que independente das mutações, a interação nos complexos se manteve, corroborando com o resultado das interações in vitro. Serão necessários novos experimentos de pull down, análises de bioinformática para esclarecer como as proteínas EIF4G se ligam especificamente aos EIF4Es. Os resultados obtidos neste trabalho foram os primeiros passos para o estabelecimento das bases de especificidade da interação EIF4G/EIF4E e poderão fornecer informações fundamentais de possíveis alvos quimioterápicos e desenvolvimento de moléculas inibidoras para controle destes patógenos.