Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2013 |
| Autor(a) principal: |
Lima, Bruna Martins Mendes Pinto |
| Orientador(a): |
Nogueira, Ana Cristina Martins de Almeida |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Não Informado pela instituição
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Link de acesso: |
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/40036
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Resumo: |
O Interferon alfa 2b recombinante corresponde ao interferon (IFN) alfa que pertence a subfamília do tipo I, sendo seu uso principal no tratamento da hepatite C. Dentre os ensaios preconizados para o controle da qualidade, o ensaio de potência do INF tem por objeto constatar se essa proteína é capaz de conter a replicação viral. O INCQS realiza o controle de todos os lotes requeridos pelo Ministério da Saúde, no entanto, não há avaliação da potência deste imunobiológico, apenas a análise documental dos lotes é feita. Neste contexto, o objetivo geral do presente projeto foi desenvolver um novo ensaio biológico para determinar a potência relativa de IFNs baseado na formação de intermediários fosforilados e proteínas relacionadas com a atividade antiviral do IFN alfa. Para tal realizamos: a padronização de um ensaio antiviral em duas linhagens celulares (Hep2C e HepG2) medindo a viabilidade celular através do MTT; a avaliação tanto da DE50 quanto da potência relativa nas duas linhagens e a comparação dos resultados obtidos; a otimização de um ensaio de potência mensurando o STAT1 fosforilado por citometria de fluxo utilizando a preparação da referência internacional do IFN; a comparação dos resultados obtidos com as linhagens Hep2C e HepG2 nos ensaios com pSTAT1; a comparação da metodologia utilizando o pSTAT1 com o ensaio antiviral e por fim a verificação da viabilidade de um ensaio de potência para o IFN utilizando a enzima 2’-5’ OAS como desfecho. Sumariamente, as duas linhagens demonstraram boa viabilidade para uso nos ensaios antivirais, entretanto, a célula Hep2C respondeu melhor ao ensaio do pSTAT1, nas condições experimentais realizadas. A linhagem celular HepG2 apresentou resultados promissores para a utilização da 2´-5´ OAS como um possível candidato para um ensaio de potência, no entanto, esses resultados precisam ser confirmados e uma curva dose-dependente ainda deve ser estabelecida. |
