Análise funcional do regulador transcricional Rv3405c em Mycobacterium bovis BCG

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2013
Autor(a) principal: Lima, Cristiane
Orientador(a): Lima, Leila de Mendonça, Galvão, Teca Calcagno
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/8057
Resumo: Em 2011 foram notificados quase 9 milhões de novos casos de tuberculose (TB), culminando em aproximadamente 2 milhões de mortes. A vacina atual contra tuberculose (BCG) apresenta eficácia variável na proteção de adultos contra a tuberculose pulmonar (0% - 80%), com isso destacamos a necessidade de maiores investigações sobre a vacina. A cepa da vacina utilizada no Brasil é a BCG Moreau. Este trabalho incide sobre a caracterização de Rv3405c, um regulador transcricional (repressor) presente em todas as cepas de BCG, porém truncado em BCG Moreau devido à perda da região genômica RD16. Analisamos por RT-PCR a expressão de genes adjacentes a rv3405c em BCG Pasteur e Moreau, comprovando que sua perda funcional afeta a expressão de rv3406, que codifica uma proteína envolvida no metabolismo do enxofre. O aumento da expressão de rv3406 em BCG Moreau pode representar um ganho funcional, devido à perda desse repressor transcricional (Rv3405) A fim de caracterizar melhor a sua função, rv3405c de BCG Pasteur e rv3406 de BCG Moreau foram clonados e expressos em E. coli. O soro policlonal produzido em camundongos imunizados contra a proteína purificada rRv3406 foi utilizado para analisar sua expressão sob diferentes condições de crescimento. Rv3406 é encontrada na fração intracelular e na superfície de BCG Moreau, não tendo sido detectado em BCG Pasteur. Rv3405c recombinante purificada foi usada no ensaio de retardo em gel (EMSA), confirmando a sua capacidade para se ligar a um motivo de DNA conservado, identificado na região intergênica entre rv3405c-rv3406, sugerindo seu papel na regulação destes genes e justificando a expressão constitutiva de rv3406 em BCG Moreau. Além disso, a adição de bile e seus componentes provoca o deslocamento da proteína desfazendo sua interação com DNA. A caracterização de rv3405c e suas funções é importante para uma análise de genômica funcional comparativa entre BCG Moreau e Pasteur. Este trabalho contribui para uma melhor compreensão da vacina brasileira contra a tuberculose