Efeito da Depleção de MAP-Quinases em Trypanosoma brucei

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Batista, Michel
• Orientador(a): Krieger, Marco Aurélio
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/23944

Os Tripanossomatídeos possuem um ciclo de vida complexo, alternando entre os ambientes distintos encontrados nos seus hospedeiros. Os mecanismos envolvidos na resposta do parasita às mudanças do ambiente ainda são pouco conhecidos, apesar de muito estudados. Dentre estes mecanismos, a fosforilação de proteínas possui um papel fundamental nas adaptações do parasita ao meio. Alguns dados, como a ausência de tirosino-quinases no genoma, a super representação de famílias de quinases, a existência de proteíno-quinases únicas, entre outros, evidenciam o processo de fosforilação como um tópico de grande interesse em Tripanossomatídeos. O protozoário Trypanosoma brucei possui 176 proteínoquinases, divididas em diversas famílias, sendo que uma das mais bem estudadas, devido à sua posição central em processos biológicos essenciais, é o das quinases ativadas por mitógeno (MAPK). Tem sido descrita a participação destas proteínas em processos como divisão e diferenciação celular, resposta ao estresse celular, entre outros. No entanto, pouco é conhecido sobre a influência destas quinases na sinalização celular dos Tripanossomatídeos. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da depleção de MAPKs sobre T. brucei. Dentre os resultados obtidos está a realização de curvas de crescimento, onde se verificou diminuição na proliferação celular em quase metade dos knockdowns analisados. O proteoma, fosfoproteoma e transcriptoma de um dos knockdowns (Tb927.10.10870) foi avaliado quantitativamente por proteômica baseada em espectrometria de massas combinada com marcação metabólica por SILAC e por RNA-Seq. No total, 1.511 proteínas, 1.510 sítios de fosforilação e cerca de 12 milhões de reads foram obtidos. Apesar da forte diminuição na proliferação celular deste knockdown, foi evidenciada pouca modulação no proteoma, fosfoproteoma e transcriptoma, indicando uma robustez na via de sinalização em estudo, corroborando com estudos publicados. Dentre as proteínas que sofreram modulação, aproximadamente um terço está relacionado à funções mitocondriais. Os sítios de fosforilação modulados após depleção da MAPK em estudo pertencem a proteínas com diferentes funções, no entanto com uma predominância de proteínas associadas à estabilização / degradação de mRNAs. A fim de se avaliar a interação entre os membros da via das MAPKs de T. brucei, fez-se a análise das interações através de duplo híbrido. Das 1.024 interações testadas, 22 foram positivas. A comparação com as interações entre os ortólogos destas proteínas, descritas em organismos modelo, não demonstrou sobreposição de nenhuma das interações positivas. Os resultados deste trabalho podem conduzir novos experimentos a fim de melhor compreender a via de sinalização das MAPKs no Tripanossomatídeos.