Diagnóstico laboratorial do vírus da herpes simples tipo 1 e inibição da replicação do HSV-1 utilizando RNA de interferência

• Ano de defesa: 2011
• Autor(a) principal: Silva, Amanda Perse da
• Orientador(a): Paula, Vanessa Salete de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/5538

O vírus do herpes simples é uma importante causa de morbidade, especialmente em pacientes imunossuprimidos. O vírus herpes simplex tipo 1 (HSV-1) é um patógeno humano pertencente à família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae. O HSV-1 infecta a mucosa oral e provoca a maioria das formas de herpes não genital, embora também possa infectar a mucosa genital em humanos. Os objetivos deste estudo foram otimizar a reação de PCR em tempo real para auxiliar o diagnóstico, detecção e quantificação do HSV-1 em pacientes imunodeprimidos; e avaliar o uso do RNA de interferencia (siRNA) para inibir a replicação do vírus HSV-1 in vitro, como uma alternativa para terapia antiviral. Para o diagnóstico do HSV-1 foram analisadas 27 amostras de pacientes; amostras de saliva e raspado da lesão (swab) de 6 pacientes com lesões caracteristicas da infecção pelo HSV-1 e 21 amostras de pacientes infectados com o HSV-1 e HIV (vírus da imunodeficiência humana). Para o estudo do silenciamento do HSV-1, três seqüências específicas de siRNA foram avaliadas ( seqüência 1, 2 e 3) como uma estratégia contra o gene UL 39 do HSV-1. Este gene é uma subunidade da ribonucleotídeo redutase, que tem a função de catalisar o passo limitante na síntese do deoxiribonucleotídeos necessários para a síntese de DNA. Nos pacientes infectados com o HSV-1, todas as amostras foram positivas na detecção do HSV-DNA por PCR em tempo real e em70% destas amostras foi possível o isolamento viral. Entre os pacientes infectados com HIV , 90,48% foram positivas para anti-HSV e a co-infecção HIV/HSV foi detectada em 100% das amostras estudadas por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o PCR em tempo real foi eficiente na detecção e quantificação do HSV-1 em diferentes tipos de amostras, e os níveis de carga viral variaram entre 100-104. Foi demostrado que a melhor concentração de siRNA utilizada para inibir o gene UL 39 do HSV-1 foi estabelecido em 10µM através da curva dose-dependentes com as três seqüências inibindo a replicação viral, no entanto a seqüência 1 foi capaz de inibir até 99% da replicação da cepa KOS e da amostra de isolado viral de um paciente infectado com HSV-1. Os resultados demostraram que o PCR em tempo real fornece resultados rápidos, com excelente sensibilidade e especificidade, e isso é especialmente importante para o diagnóstico em pacientes imunodeprimidos. As sequências de siRNA analisadas foram eficazes na inibição da replicação do HSV- 1 in vitro, porém outras investigações sobre os possíveis efeitos beneficos do siRNA in vivo são necessários