Caracterização do gene RB1 e da região cromossômica 13q14 em portadores de deleções em RB1, e estudo de associação de polimorfismos do gene CDKN1B em portadores de retinoblastoma

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Freitas, Renata Mendes de
• Orientador(a): Vargas, Fernando Regla
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/34578

O retinoblastoma se inicia, na grande maioria dos casos, a partir de dois eventos mutacionais no gene RB1 nos retinoblastos. O rastreamento desse gene em portadores da doença e em seus familiares torna-se importante para caracterizar mutações germinativas causadoras da tumorigênese e promover o acompanhamento genético das famílias. Porém, a doença pode ser modulada pela presença de diversos polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs). No presente estudo foi realizado o rastreamento do gene RB1 em 11 probandos diagnosticados com retinoblastoma através de sequenciamento Sanger e a caracterização genômica, através de PCR em tempo real e array-CGH, de cinco portadores de retinoblastoma com deleção do gene RB1 previamente identificados por Sena (2013), sendo que dois probandos apresentam deleção parcial e três com deleção completa do gene RB1. Foram identificadas duas variantes em regiões exônicas e 18 em regiões intrônicas, sendo seis ainda não descritas (c.848 g>T; c.380+145 T>A; c.1216-28 C>T; c.1389+134 A>T; c.1389+143 C>T; c.1814+72 T>A). Três mutações germinativas identificadas no gene RB1 foram analisadas por modelagem comparativa, para verificar os domínios alterados pelas mutações e correlacioná-las com o comprometimento da funcionalidade da proteína retinoblastoma As mutações do tipo stop códon, que afetam o domínio pocket da proteína, são associadas com a forma bilateral da doença. Uma metodologia em PCR em tempo real foi desenvolvida para dosar o número de cópias gênicas do RB1, SUCLA2 e MED4, localizados na região 13q14, em 5 probandos diagnosticados com retinoblastoma investigados para deleções. Foi detectada a presença de deleções completas e intragênicas no RB1, SUCLA2 e MED4, de forma a validar os resultados obtidos previamente pela técnica de MLPA. Entre os probandos com deleção completa, o tamanho da deleção variou de 12 a 42 Mb. Foi realizada uma revisão sistemática da literatura para investigar associação entre tamanho da deleção do gene RB1 e lateralidade tumoral. Foram incluídos, além do presente estudo, outros 11 estudos, totalizando 112 probandos com deleção parcial ou completa do gene RB1 A forma bilateral da doença foi mais prevalente no grupo de probandos portadores de deleções parciais do gene RB1, quando comparado com probandos com deleção completa (p=0,00007). Em função do pequeno número de estudos disponíveis, não foi possível analisar a correlação entre tamanho da deleção, e a deleção concomitante dos genes adjacentes MED4 e SUCLA2. O polimorfismo rs2066827 no gene CDKN1B, importante regulador do ciclo celular, codificador da proteína p27, foi avaliado em 72 portadores do retinoblastoma como um possível modificador do fenótipo. Não se verificou associação desse SNP como agente de susceptibilidade ao desenvolvimento do retinoblastoma, nem efeito protetor. Observou-se maior proporção do genótipo heterozigótico entre os controles avaliados neste estudo, mas sem significância estatística. As frequências alélicas também não apresentaram associação estatística. Contudo, a comparação da distribuição de genótipos dos 72 probandos analisados com outro grupo controle retirado da população brasileira para o mesmo polimorfismo investigado por Longuini et al. (2014) mostrou diferença significativa (p=0,03).