Desenvolvimento e caracterização de anticorpos humanos com potencial neutralizante do vírus Zika
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| spelling | França, Renato Kaylan Alves de OliveiraMaranhão, Andréa QueirozBrígido, Marcelo de Macedo2021-01-27T00:26:48Z2021-01-27T00:26:48Z2021-01-262020-08-27FRANÇA, Renato Kaylan Alves de Oliveira. Desenvolvimento e caracterização de anticorpos humanos com potencial neutralizante do vírus Zika. 2020. xv, 114 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2020.https://repositorio.unb.br/handle/10482/39971Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2020.A infecção pelo vírus Zika está associada a complicações neurológicas e a anomalias congênitas e é considerada um problema de saúde pública em todo o mundo, que ainda não possui abordagens profiláticas e terapêuticas eficazes estabelecidas. Entre as estratégias de tratamento, o desenvolvimento de novos anticorpos monoclonais humanos engenheirados se ressai por sua alta afinidade, maior especificidade, segurança farmacológica e sua maior capacidade protetora. Nesse sentido, o objetivo desse trabalhou foi o desenvolvimento de anticorpos específicos para o loop de fusão do domínio II do envelope viral, região que exerce função na liberação do RNA viral no citoplasma, durante a infecção, e é altamente conservado entre os Flavivírus. Para isso, desenvolvemos anticorpos humanos específicos, utilizando a tecnologia de Phage Display. A seleção foi realizada em 4 ciclos de seleção contra o loop de fusão do vírus, usando duas estratégias de eluição dos fagos específicos: com pH ácido, e com o antígeno viral, livre e em excesso, competindo pela ligação ao anticorpo. A análise do progresso de seleção revelou que houve enriquecimento de anticorpos específicos ao antígeno viral. Os anticorpos que poderiam apresentar maior afinidade foram engenheirados no formato de scFv (Fragmento variável de cadeia única), e três deles foram produzidos em altos níveis, em sistema heterólogo de células bacterianas, e purificados, por cromatografia de afinidade em coluna de Níquel. Foi demostrado que os anticorpos recombinantes selecionados e produzidos apresentaram capacidade de ligação ao antígeno viral, na sua forma isolada e na sua conformação nativa na partícula do vírus Zika. Também foi mostrado que os anticorpos foram capazes de neutralizar a infecção por vírus Zika in vitro. Esses dados evidenciam o potencial neutralizante dos anticorpos humanos desenvolvidos nessa pesquisa e revelam a relevância deles no desenvolvimento de metodologias eficientes e seguras de tratamento de infecções por vírus Zika e de outros Flavivirus.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).Infection with the Zika virus is associated with neurological complications and congenital abnormalities and it is considered a public health problem worldwide that does not have prophylactic and therapeutic approaches applied yet. Among the treatment strategies, the development of new engineered human monoclonal antibodies, which stand out for their high affinity, greater specificity, pharmacological safety and their high protective capabilities. The aim of this work is to develop a single chain variable fragment of antibody specific to the fusion loop of the viral envelope domain II, region that plays a role in the release of viral RNA in the cytoplasm, during infection, and it is highly conserved among Flaviviruses, in other to neutralize the Zika virus infection. We achieve that using Phage-Display technology, with a human antibody gene library. The selection was carried out in 4 selection cycles against immobilized synthetic peptides, using two elution strategies: one, with acidic pH, and the other, with excess mimetic peptides, competing for binding to the antibody. Deep sequencing of selected VH and VL domains revealed there was an enrichment of specific antibodies to the viral antigen. The VH and VL sequences mostly enriched at the fourth cycle was selected for designing seven different scFv (single chain variable fragment) molecules. Three of them were overproduced, in heterologous system of bacterial cells, and purified by Nickel column affinity chromatography. We demonstrated that selected and produced recombinant antibodies showed ability to bind to viral antigen, in its isolated form and in its native conformation in the whole Zika virus particle. It was also shown the antibodies were able to neutralize Zika virus infection in vitro. These data evidenced the potential neutralizing activity of the recombinant human antibodies developed in this research, and revealed their relevance on the development of efficient and safe methods of treating infections by Zika virus and other Flaviviruses.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Departamento de Biologia Celular (IB CEL)Programa de Pós-Graduação em Biologia MolecularporA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessDesenvolvimento e caracterização de anticorpos humanos com potencial neutralizante do vírus Zikainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisZika vírusAnticorpos monoclonais humanosAnticorposreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2020_RenatoKaylanAlvesdeOliveiraFranca.pdf2020_RenatoKaylanAlvesdeOliveiraFranca.pdfapplication/pdf5612556http://repositorio.unb.br/bitstream/10482/39971/1/2020_RenatoKaylanAlvesdeOliveiraFranca.pdfb25857207aeadd457dddfb80f1fe818cMD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain676http://repositorio.unb.br/bitstream/10482/39971/2/license.txt59c0495af143a2dbef8cb1eca992b8cfMD52open access10482/399712025-11-13 17:13:06.212open accessoai:repositorio.unb.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2025-11-13T20:13:06Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB) |
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