Caracterização de vesículas extracelulares e tráfego de antígeno B no contexto da infecção pela forma de Echinococcus spp. - Silva, Edileuza Danieli da (2018)
Echinococcus granulosus e Echinococcus ortleppi são agentes etiológicos da hidatidose cística. A doença é decorrente do desenvolvimento do estágio larval, o cisto hidático, no interior das vísceras do hospedeiro, principalmente fígado e pulmões. Os cistos hidáticos tem uma estrutura unilocular e preenchida por fluido, que contém os produtos de excreção/secreção do parasito. Os produtos de excreção/secreção têm um importante papel na interação parasito-hospedeiro e constituem potenciais alvos para diagnóstico, drogas antiparasitárias e vacinas. Diversos estudos têm ressaltado a importância de vesículas extracelulares (EVs) na comunicação intercelular de helmintos parasitas. O Antígeno B (AgB) é um produto de excreção/secreção cujo envolvimento na imunoevasão e captura/transporte de lipídios é conhecido em Echinococcus spp. O objetivo deste estudo foi investigar a relação parasito-hospedeiro no contexto desses dois importantes produtos de excreção/secreção de Echinococcus spp.: as vesículas extracelulares e o Antígeno B. Combinando ensaios de inibição de endocitose e colocalização, nós encontramos que a endocitose mediada por rafts lipídicas é a principal via envolvida na internalização de AgB por células in vitro. A via de endocitose mediada por vesículas de clatrina também pode contribuir para a internalização do AgB, porém em taxas menores. EVs de E. granulosus e E. ortleppi foram isoladas de líquido hidático e sobrenadantes de cultura de protoescólices por ultracentrifugação. A presença de EVs nas preparações foi confirmada por microscopia eletrônica de transmissão e NTA (nanoparticle tracking analysis), que mostraram a maioria das EVs com um diâmetro em torno de 100 nm. Uma linhagem de hepatócitos (RH) foi capaz de internalizar as EVs de Echinococcus spp., confirmando seu potencial para interação com o hospedeiro na hidatidose cística. A análise proteômica mostrou que a variabilidade no conteúdo de EVs entre cistos da mesma espécie é um traço comum em E. granulosus e E. ortleppi. Na comparação entre as duas espécies foi observada maior diversidade de proteínas em E. granulosus. As proteínas identificadas podem ser essenciais para a sobrevivência de Echinococcus spp., e algumas, como enolase, 14-3-3 e Antígeno 5, já foram sugeridas tendo papel nas interações parasito-hospedeiro. Adicionalmente, nós detectamos mRNAs nas preparações, indicando que essa classe de biomoléculas também integra as EVs de Echinococcus spp. O entendimento dos mecanismos associados às atividades do AgB e dos agentes moleculares nas EVs levará a uma melhor compreensão da relação Echinococcus-hospedeiro.