Caracterização molecular de bacilos gram-negativos isolados em unidade de terapia intensiva neonatal e detecção fenotípica e molecular de esbl e carbapenemases. - Barbosa, Thaís Alves [UNESP] (2020)
A elevação das taxas de bactérias multirresistentes em ambientes destinados a prestação de cuidados à saúde é reconhecido como um problema de saúde pública mundial. Atualmente, as opções terapêuticas são limitadas em decorrência da produção de β-lactamases de espectro estendido (ESBL), β-lactamases do tipo AmpC e carbapenemases. Tais enzimas são capazes de se disseminar com facilidade entre patógenos, dificultando o controle e o tratamento das infecções nosocomiais. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo principal estudar micro-organismos Gram-negativos isoladas de aspirado traqueal (AT) e da mucosa nasal (MN) e anal (MA) de neonatos da UTIN pertencentes ao Hospital das Clínicas (HC) da Faculdade de Medicina de Botucatu (FMB). Os micro-organismos foram coletados previamente em um estudo de coorte prospectivo no período de novembro de 2013 a novembro de 2014, visando determinar a resistência aos antimicrobianos, fatores de virulência e pesquisa de clones prevalentes na Unidade. As enterobactérias e os bacilos gram-negativos não fermentadores (BGNF) previamente coletados foram submetidos à identificação genotípica, detecção de β-lactamases de espectro estendido (ESBL), β-lactamases do tipo AmpC e carbapenemases, produção de biofilme e detecção de marcadores de virulência específicos em Pseudomonas aeruginosa. Para a pesquisa de clones prevalentes na unidade, foi realizada a tipagem pela técnica de eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Os resultados revelaram que as enterobactérias foram os micro-organismos predominantes em sítios de colonização e infecção. Este trabalho demonstrou maior colonização da MA seguida pela MN. Enterobacter cloacae foi a espécie isolada com maior frequência em amostras de colonização. Os dados aqui encontrados revelaram maiores índices de infecção por Klebsiella spp. e Serratia marcescens, causando infecção da corrente sanguínea e pneumonia, respectivamente. Nesta pesquisa, pôde ser observada elevada produção de biofilme, sendo que 95,0% das enterobactérias e 100% dos BGNF foram produtores, com maior proporção de enterobactérias mostrando média produção de biofilme, enquanto os BGNF demonstraram em sua maioria serem fortes produtores. Através da pesquisa dos genes codificadores de fatores de virulência específicos para Pseudomonas aeruginosa foi possível observar que a maioria dos isolados apresentaram genes codificadores de alginato, fosfolipase C hemolítica, exotoxina A e ramnolipídeos. A pesquisa fenotípica de ESBL revelou 16 (5,3%) dos isolados produtores dessas enzimas. Dentre esses, seis apresentaram genes de resistência, quatro (66,7%) apresentaram o gene codificador de CTX-M-9, três (50%) apresentaram o gene de TEM e um (16,7%) foi positivo para o gene de SHV e de CMY-2. A pesquisa de β-lactamases do Tipo AmpC revelou a produção fenotípica por 20 isolados e, destes, dois apresentaram o genótipo EBC. Através da análise do perfil genético, foi possível observar linhagens idênticas de espécies de enterobactérias em diferentes sítios de coleta de RNs distintos, evidenciando possível transmissão cruzada; além disso, foi possível identificar característica de persistência de algumas cepas dentro da unidade. Empregou-se uma análise uni e multivariada de regressão de Cox para verificar os fatores de risco de colonização e infecção por micro-organismos Gram-negativos. Os resultados da análise multivariada revelaram que, a cada semana a mais na idade gestacional, aumenta o risco diário em 7,0% para a colonização do RN por bacilos Gram-negativos, enquanto o uso de antimicrobianos nas primeiras 72 horas diminui o risco diário em 35% de colonização por esses patógenos. Além disso, a produção de biofilme por esses micro-organismos apresentou associação com a persistência da colonização do RN pelo mesmo patógeno e aumenta em 75% a chance diária do RN evoluir para infecção, assim como a produção de ESBL, que aumenta a chance diária em 46,8 vezes para o RN ter infecção. Os dados desta pesquisa são de fundamental importância para a saúde pública, pois permitem o conhecimento da epidemiologia molecular de espécies importantes de enterobactérias na UTIN de um hospital universitário terciário de alta complexidade, permitindo, assim, a intensificação do monitoramento e implantação de medidas de controle e precaução.