Estabelecimento de modelo in vitro para estudo de efeitos de miRBARTs do EBV em células humanas de epitélio nasofaríngeo

• Main Author: Rocha, Viviana Loureiro
• Publication Date: 2022
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UNESP
• Download full: http://hdl.handle.net/11449/235157
• topic: Carcinogênese; MicroRNAs; Herpesvírus humano; Técnicas in vitro

A infecção pelo vírus de Epstein-Barr (EBV) está associada a alguns tipos de cânceres, como o linfoma de Burkitt (BL) e o carcinoma de nasofaringe (NPC). O EBV é ubíquo e infecta, de forma latente, a maioria da população adulta. A latência biológica do EBV é caracterizada por elevada restrição na expressão de produtos virais, sendo limitada a poucas proteínas e RNAs não codificantes, como os miR-BARTs. A superexpressão de miR-BART 7 no NPC regula a expressão do produto do gene supressor tumoral PTEN. O miR-BART 9, por sua vez, regula a expressão da oncoproteína viral LMP1 e de caderina E celular. A regulação da expressão destas proteínas sugere papel dos miR-BARTs 7 e 9 no fenômeno de transição epitelial-mesenquimal (EMT), importante para progressão de cânceres de origem epitelial. Dessa forma, este estudo tem como objetivo a criação de um modelo experimental para verificar o papel exercido por miR-BART 7 e miR-BART 9 na aquisição de características favoráveis a carcinogênese. O modelo estabelecido baseia-se em células de epitélio de nasofaringe infectadas com partículas virais selvagens ou mutadas para estes miRNAs. A construção deste modelo emprega a tecnologia CRISPR/Cas9 para edição do genoma do EBV em células Akata-EBV+. As células Akata-EBV+ com genoma selvagem ou mutado foram quimicamente tratadas para ativação de ciclo lítico, e produção de partículas virais. A validação foi realizada a partir da expressão de marcadores de ciclo lítico, BZLF1 e gp350, enquanto a quantificação das partículas produzidas foi realizada a partir de curva-padrão com o genoma B95-8. A infecção de células epiteliais de nasofaringe foi avaliada a partir da estimativa do número de cópias do genoma viral. As células Akata-EBV+ contendo os genomas com comprometimento da expressão dos miR-BARTs 7 ou 9 apresentaram deficiência na produção de partículas virais quando comparadas as células contendo o genoma selvagem, enquanto na infecção de células epiteliais de nasofaringe, o comprometimento da expressão dos miR-BARTs 7 ou 9 influenciou positivamente, aumentando o número de cópias virais nas células infectadas com as versões editadas. Os dados apresentados demonstram estabelecimento de modelo experimental de estudo dos miR-BARTs do EBV, e indicam uma possível relação com eventos relacionados ao ciclo lítico do vírus.