Criopreservação do sêmen de garanhões da raça crioula com baixo e alto escore de condição corporal e refrigeração de sêmen equino com diluentes a base de caseína. - Novello, Guilherme (2020)
A criopreservação (resfrigeração e congelamento) de sêmen equino é uma biotecnologia amplamente utilizada na indústria de criação de cavalos. No entanto, vários fatores podem afetar a qualidade seminal e a fertilidade do sêmen criopreservado. Claramente, as individualidades dos garanhões associadas à capacidade de resfriamento ou congelamento do sêmen, diluentes de sêmen, sistema de transporte e processamento são bem descritas como associadas a alterações na qualidade seminal. Nos homens, a obesidade e a síndrome metabólica têm sido associadas a efeitos adversos nos parâmetros espermáticos. Com isso, o objetivo deste estudo foi testar diferentes diluentes de sêmen, dispositivos de resfriamento, processamento, bem como comparar a capacidade de congelamento de sêmen de garanhões com baixo escore de condição corporal e alto escore de condição corporal. Capítulo 2: Primeiramente, foram testados os parâmetros de cinética espermática e as taxas de recuperação embrionária do sêmen diluído e refrigerado com diferentes extensores à base de caseína (INRA 96 ou BotuSêmen Gold) com ou sem plasma seminal e armazenados em três diferentes dispositivos comerciais de refrigeração. No experimento 1, 45 ejaculados de nove garanhões foram coletados, avaliados e igualmente divididos entre os diluentes e depois diluídos para 50 milhões de espermatozoides/mL. Em seguida, o sêmen diluído foi armazenado em três containers de refrigeração passiva (Equitainer, Equine Express II e BotuFlex) por 48 horas. No experimento 2, os mesmos ejaculados diluídos no experimento 1 foram centrifugados com cushion, o sobrenadante foi descartado e o “pellet” foi ressuspenso a 100 milhões de espermatozoides/mL com seu respectivo extensor. O sêmen foi então refrigerado como no experimento 1. Nos dois experimentos, os parâmetros de cinética espermática, integridade da membrana plasmática e o alto potencial da membrana mitocondrial foram avaliados às 0, 24 e 48 horas após o resfriamento. Para o experimento 3, 12 éguas (n = 24 ciclos) foram inseminadas com sêmen de um garanhão refrigerado por 48 horas. O sêmen foi processado como descrito no experimento 1. O lavado de embrião foi realizado 8 dias após a ovulação. No experimento 1, o BotuSêmen Gold apresentou motilidade total e progressiva superior em relação ao INRA 96 (P <0,05). Não houve diferenças significativas entre os sistemas de refrigeração em nenhum dos experimentos. No experimento 2, os diluentes INRA 96 e BotuSêmen Gold apresentaram motilidade total e progressiva semelhante, no entanto o BotuSêmen Gold apresentou parâmetros superiores de velocidade espermática em todos os momentos. A recuperação embrionária foi idêntica para os dois extensores (50%). Finalmente, os resultados aqui obtidos sugerem que o BotuSêmen Gold é um diluente de sêmen equino a ser incluído nos testes frente ao INRA 96 na prática clínica. Em segundo lugar, foi avaliado o efeito do escore de condição corporal (ECC) na capacidade de congelamento de sêmen de garanhões da raça Crioula. Vinte garanhões foram alocados em 2 grupos de acordo com o ECC: os garanhões com ECC <7 foram caracterizados como Baixo-ECC (11/20) e os garanhões com ECC ≥7 como Alto-ECC (9/20). Foi obtida uma história clínica completa seguida de medidas morfométricas e de acúmulo de gordura subcutânea. As concentrações plasmáticas de glicose foram avaliadas após teste oral de tolerância a glicose. Para isso, os garanhões foram submetidos a jejum durante a noite e o xarope de milho foi administrado por via oral às 8h da manhã. Amostras de sangue foram coletadas para avaliação da glicose antes e após a administração oral de xarope de milho. Além disso, um ejaculado de cada garanhão foi coletado e diluído a 50 milhões de espermatozoides/mL com extensor à base de leite desnatado (BotuSêmen, Botupharma, Brasil). O sêmen foi centrifugado (600 × g / 10 min), o sobrenadante foi descartado e o “pellet” ressuspenso a 200 milhões de espermatozoides/mL com BotuCrio (Botupharma, Brasil) e submetido ao processo de criopreservação. A cinética espermática foi avaliada por CASA e integridade da membrana plasmática, ãnion superóxido, potencial mitocondrial, peroxidação lipídica e peróxido de hidrogênio pela citometria de fluxo em amostras de sêmen pós-descongelamento. O estudo morfométrico (peso corporal, ECC e circunferência do pescoço em 25% e 50%) foi superior em garanhões com alto-ECC (P <0,05). No entanto, não houve diferenças nos parâmetros espermáticos ou na concentração plasmática de glicose entre os grupos (P> 0,05). Em resumo, o alto ECC não afetou os parâmetros espermáticos e a capacidade de congelamento de sêmen de garanhões da Raça Crioula.