Cistatina recombinante da Citrus sinensis (CsinCPI-2) induz proliferação, migração e diferenciação osteogênica de células da polpa dental humana - Viola, Kennia Scapin (2019)
As cistatinas são inibidores naturais de cisteíno proteases e desempenham um papel crítico no controle da degradação de proteínas. As cistatinas de plantas, dentre elas a cistatina produzidas de forma recombinante a partir da Citrus sinensis (CsinCPI-2), têm mostrado potencial para serem usadas em diferentes abordagens terapêuticas. Os objetivos deste estudo foram avaliar a citocompatibilidade e o efeito da fitocistatina CsinCPI-2 sobre a proliferação, migração e diferenciação osteogênica de células da polpa dental humana (hDPCs). Previamente à realização dos ensaios, as hDPCs foram caracterizadas quanto a expressão de marcadores de células tronco mesenquimais por meio de citometria de fluxo. hDPCs expostas à CsinCPI-2 e não expostas (controle) foram avaliadas quanto à viabilidade celular por meio dos ensaios de metiltiazol tetrazólio (MTT) e alamar blue, apoptose por meio de citometria de fluxo, atividade da fosfatase alcalina (ALP) por meio do cálculo da liberação de timolfitaleína, produção de nódulos mineralizados por meio de coloração com vermelho de alizarina, migração celular pelo ensaio de transwell, proliferação por meio de ensaio de incorporação de bromodeoxiuridina (BrdU) e expressão gênica de proteína morfogenética óssea 2 (BMP-2), fator de transcrição osteogênica (RUNX2), fosfatase alcalina (ALP), osteocalcina (OC), sialoproteína óssea (BSP) e proteína da matriz da dentina (DMP-1) por meio da reação da polimerase em cadeia em tempo real quantitativa (qPCR).Os dados foram analisados por análise de variância (ANOVA) one way e pós-teste de Turkey, ANOVA two way e pós-teste de Bonferroni ou teste t (α = 0,05). As hDPCs utilizadas nos ensaios mostraram marcação positiva para células tronco mesenquimais (CD105, CD90, CD73, CD146) e negativa para células hematopoiéticas e endoteliais (CD45, CD34). A CsinCPI-2 foi citocompatível e não induziu apoptose. Houve maior formação de nódulos mineralizados, atividade de ALP, proliferação e migração celular e maior expressão dos genes BMP-2, RUNX2, ALP, OC. BSP e DMP-1 no grupo da CsinCPI-2 em relação ao controle (P < 0,05). Em conclusão, a CsinCPI-2 foi citocompatível, induziu migração e prolifereção celular, bem como a diferenciação de hDPCs em fenótipo osteogênico. Portanto, a CsinCPI-2 pode ser uma molécula promissora para ser utilizada em técnicas de regeneração/reparação pulpar e periapical.