Análise da força de expressão de promotores pip-box de Xanthomonas citri subsp. citri - Luana Cristina Amistá [UNESP] (2024)
A bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (X.citri) é o agente causal do cancro cítrico, responsável pela devastação de pomares inteiros em países produtores de laranja, incluindo o Brasil. Na literatura é descrito que diversas bactérias fitopatogênicas possuem, em locais específicos do genoma, uma sequência consenso localizada na região promotora denominada “PIP-box” (Plant-Inducible Promoter box). As caixas PIP são responsáveis pela ativação de uma ampla gama de genes, incluindo a expressão de fatores de patogenicidade e virulência durante interações planta-patógeno. Neste estudo, realizou-se a avaliação funcional e a análise da intensidade de expressão de possíveis promotores “PIP-box” que se encontram na região 5’ não traduzida dos genes XAC0360, XAC2370 e XAC2922 de Xanthomonas citri subsp. citri isolado 306 (X. citri 306). As sequências PIP-box putativas foram fusionadas à região 5’ da sequência do gene gfp no vetor de expressão pRMF e os vetores recombinantes foram inseridos em X. citri 306 por eletroporação. A quantidade de proteína GFP produzida pelas linhagens recombinantes de X. citri 306 como resultado da ativação de cada promotor PIP-box foi avaliada por microscopia de fluorescência em duas condições diferentes: crescimento por 20 horas em meio de cultura XVM2, que simula o apoplasto e conhecido como meio indutor de expressão de genes hrp, usando como controle crescimento em meio não indutor NYG; crescimento por 5 dias após inoculação em folhas de laranja doce ‘Pêra’. Os resultados das análises demonstraram que as sequências “PIP-box” foram capazes de dirigir a transcrição do gene gfp presente à jusante, e a análise estatística mostrou que há diferença significativa entre os promotores em relação à força de expressão. Além disso, há diferenças quando se compara a força de expressão de cada promotor em meio de cultura indutor e in planta.