Identificação e caracterização molecular do antígeno 5 do veneno da vespa neotropical Apoica pallens (Hymenoptera, Vespidae) - Moraes, Gabriel Hideki Izuka (2019)
O antígeno 5 (Ag 5) é uma das proteínas mais comuns no veneno de vespas sociais. Embora sua função biológica seja desconhecida, o Ag 5 possui grande importância clínica por ser um dos componentes do veneno com maior potencial de causar reações de hipersensibilidade em pessoas alérgicas. O correto diagnóstico e o tratamento de casos de alergia envolvem o uso de alérgenos purificados para a identificação da espécie responsável pela sensibilização primária, o que, por sua vez, requer extensos trabalhos de caracterização molecular das proteínas do veneno. No Brasil, no entanto, há uma carência de dados sobre os alérgenos de espécies nativas de relevância clínica. Neste trabalho, foram utilizadas estratégias proteômicas e bioinformáticas para identificar e caracterizar o Ag 5 (Apo p 5) da vespa social Apoica pallens. A proteína foi identificada por SDS-PAGE e purificada por cromatografia líquida de troca catiônica, seguido de digestões in gel e em solução com enzimas proteolíticas. Os peptídeos gerados foram identificados por espectrometria de massas do tipo MALDI-ToF e ESI-QToF e comparados com sequências de Ag 5 de referência até a obtenção da estrutura primária completa do Apo p 5. Ferramentas in silico permitiram modelar a estrutura 3D do Apo p 5 e predizer possíveis modificações pós traducionais. Como resultado, obteve-se uma proteína com 207 resíduos de aminoácidos, massa teórica de 23 kDa e alta identidade com o Ag 5 de espécies da subfamília Polistinae. Ensaios de immunoblot confirmaram a alergenicidade da proteína, reconhecida pelo IgE de soros de pacientes alérgicos ao veneno de vespas. A estrutura 3D revelou uma proteína com 28 % de α-hélices e 17,1 % de folhas-β, também com alta similaridade com o Ag 5 de himenópteros de elevada relevância clínica. Os dados obtidos com este trabalho fornecem as bases para a produção heteróloga da proteína e seu emprego em sistemas de diagnóstico de alergia ao veneno de A. pallens no Brasil.