Associação da quitosana à terapia fotodinâmica para controle de Candida albicans: estudo em culturas planctônicas, biofilmes e células persistentes - Lapena, Simone Aparecida Biazzi De (2021)
A terapia fotodinâmica (TFD) vem se mostrando como um método eficaz no controle de micro-organismos patogênicos, sendo investigada para o tratamento de diversas doenças infecciosas, como a candidose bucal. Recentemente, alguns agentes potencializadores dessa terapia têm sido estudados, incluindo a Quitosana (QT), um polímero natural extraído do exoesqueleto de crustáceos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito potencializador da QT na TFD mediada pelo fotossensibilizador Azul de Metileno (AM) sobre cepas de Candida albicans, investigando sua ação em culturas planctônicas, biofilmes e células persistentes ao fluconazol. Além disso, foi avaliado a capacidade da QT em interferir na absorção do AM pelas células de Candida. Foram utilizadas duas cepas de C. albicans, sendo uma padrão (ATCC 18804) e uma clínica isolada de candidose orofaríngea (70). Para os ensaios em culturas planctônicas, as cepas de C. albicans foram cultivadas em caldo Yeast Nitrogen Base (YNB) por 24 horas. Os biofilmes foram formados por 48 horas no fundo das placas de 96 poços. Para indução de células persistentes, C. albicans foi cultivada com altas concentrações de fluconazol por 48 horas. A seguir, foram realizados os tratamentos com QT a 5 mg/mL (pH de 6,5), AM nas concentrações de 300 ou 600 μM, e irradiação com LED (660 nm) na densidade de energia de 30 J/cm2. Foram incluídos oito grupos experimentais: TFD com AM e QT na presença de Luz (AM+QT+L+), AM e QT sem Luz (AM+QT+L-), QT e Luz (QT+L+), QT sem Luz (QT+L-), TFD com AM e Luz (AM+L+), AM sem Luz (AM+L-), Solução Fisiológica com Luz (F-L+) e apenas Solução Fisiológica (F-L-). Após os tratamentos, foi realizada contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Para determinar a absorção do fotossensibilizador pelas células de C. albicans, as células foram lisadas e centrifugadas para leitura da densidade óptica. Os dados foram analisados por ANOVA e teste de Tukey (p<0,05%). Na TFD em culturas planctônicas, o AM (300 μm) reduziu as células de Candida em 1,6 log (UFC/mL), enquanto que a associação AM+QT levou à redução de 4,7 log. Na TFD em biofilmes, ocorreu redução microbiana de 2,9 log para o tratamento com AM (600 μm) e de 5,3 log para AM+QT. Em relação às células persistentes, a redução encontrada foi de 0,8 log para AM e 1,5 log para AM+QT. No teste de absorção, a penetração do AM nas células de Candida (DO 0,02) foi aumentada na presença da QT (DO 0,39). Concluiu-se que a QT potencializou o efeito antimicrobiano da TFD em culturas planctônicas, biofilmes e células persistentes de C. albicans, provavelmente por facilitar a penetração do AM nas células fúngicas.